（一）染劑(Hucker修改法）
1.結晶紫的混合液
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甲液：結晶紫 |
2.0g |
乙醇（95%） |
20ml |
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乙液：草酸銨 |
0.8g |
蒸餾水 |
80ml |
將甲、乙兩液相混，靜置48h後過濾實用。此染液較穩定，在密閉的棕色瓶中可儲藏數月。
2.碘液
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碘 |
1.0g |
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碘化鉀 |
2.0g |
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蒸餾水 |
300ml |
先用少量(3～5ml)蒸溜水溶解碘化鉀，再投入碘片，待碘全溶解後，加水稀釋至300ml。
3.脫色液
（1）95%乙醇
（2）丙酮乙醇溶液：乙醇（95%） 70ml
丙酮 30ml
4.複染液
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0.5％的番紅(Safranine0) |
水溶液 |
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番紅2.5％的乙醇溶液 |
20ml |
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蒸溜水 |
80 ml |
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可將2.5％番紅0乙醇溶液作為母液， 使用時再稀釋 |
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（二）染色步驟
(1)用接種針挑取少許菌苔，塗布在幹淨玻片上的一滴無菌水或蒸餾水中，風幹固定
(2)用結晶紫的混合液染1min後，用水洗。
(3)碘液作用1min,水洗，吸幹。
(4)用95％乙醇或丙酮乙醇溶液脫色，流滴至洗脫液至無色（約30s)。用番紅液染2-3min,水洗、風幹。
（三）結果觀察
深紫色為革蘭氏染色陽性細菌；紅色為革蘭氏染色陰性細菌。
（四）注意事項
(1)所觀察的細胞一般為24h的培養物。
(2)染色結果可疑時，以金黃色葡萄球菌為陽性對照菌，以大腸埃希氏菌為陰性對照菌。
本文節選自《常見細菌係統鑒定手冊》第十二章。
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