1.培養基
肉汁腖培養基 |
1000ml |
KNO3 |
1g |
pH 7.0-7.6 |
每管分裝4-5 ml, 121℃蒸氣滅菌15-20 min。
2.試劑
(1)格裏斯氏(Griess)試劑
A液 |
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對氨基苯磺酸 |
0.5g |
稀醋酸(10%左右) |
150ml |
B液 |
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α-萘胺 |
0.1g |
蒸餾水 |
20ml |
稀醋酸(10%左右) |
150ml |
(2)二苯胺試劑:二苯胺0.5g溶於100 ml濃硫酸中,用20 ml蒸餾水稀釋。
3.接種
將測定菌接種於硝酸鹽液體培養基中,置適溫培養1,3,5天。每株菌作二個重複,另留兩管不接種作對照。
4.操作
取二支幹淨的空試管或在比色瓷盤小窩中倒入少許培養l,3,5天的培養液,再各加一滴A液和B液,在對照管中同樣加入A液,B液各一滴。
5.結果觀察
當培養液中滴入A,B液後,溶液如變為粉紅色、玫瑰紅色、橙色、棕色等表示亞硝酸鹽存在,為硝酸鹽還原陽性。如無紅色出現,則可加一、二滴二苯胺試劑,此時如呈藍色反應,則表示培養液中仍有硝酸鹽,又無亞硝酸鹽反應,表示無硝酸鹽還原作用;如不呈藍色反應,表示硝酸鹽和形成的亞硝酸鹽都已還原成其他物質,故仍應按硝酸鹽還原陽性處理。
6.注意事項
(1)還原硝酸鹽反應是在較為厭氧條件下進行的,雖不必用礦油封液麵,但分裝試管時液層不宜太薄,對生長緩慢的細菌尤應注意。
(2)對不同種的細菌來說,亞硝酸鹽可以是硝酸鹽還原的最終產物,也可以是整個 還原過程的中間產生,另一方麵,有的種還原極為迅速,有的種還原緩慢因而第一次檢查這一項目時要及時(18-24 h),並且對陰性反應的菌株應連續觀察。並且對千未呈現亞硝酸鹽反應的測定應檢查是否仍有硝酸鹽(二苯胺測定),然後才能判斷有無硝酸鹽的還原反應。
本文節選自《常見細菌係統鑒定手冊》第十四章。
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