一、目的要求
1 學習微生物塗片、染色的基本技術，拿握細菌的簡單染色法．
2 初步認識細菌的形態特征。
3 鞏固顯微鏡（油鏡）的使用方法和無菌操作技術．
二、基本原理
簡單染色法是利用單一染料對細菌進行染色的一種方法．此法操作簡便，適用於菌體一般形狀和細菌排列的觀察。
常用堿性染料進行簡單染色，這是因為：在中性、堿性或弱酸性洛液中，細菌細胞通常帶負電荷，而堿性染料在電離時．其分子的染色部分帶正電荷（酸性染料電離時，其分子的染色部分帶正電荷），因此堿性染料的染色部分很容易與細菌結合使細菌著色．經染色後的細菌細胞與背景形成鮮明的對比，在顯微鏡下更易於識別．常用作簡單染色的染料有：美藍、結晶紫、堿性複紅等．
當細菌分解搪類產酸使培養基pH 下降時，細菌所帶正電荷增加，此時可用伊紅、酸性複紅或剛果紅等酸性染料染色．
三、器材
l.菌種枯草芽孢杆菌12 ~18h 營養瓊脂斜麵培養物，藤黃微球菌約24h 營養瓊脂斜麵培養物．
2 ．染色劑呂氏堿性美藍染液（或草酸按結晶紫染液），齊氏石炭酸複紅染液．
3 ．儀器或其他用具 顯微鏡．酒精燈，載玻片，接種環，雙層瓶（內裝香柏油和二甲苯），擦鏡紙，生理鹽水等．
四、操作步驟．
1 ．塗片
2 ．幹燥
室溫自然幹燥。
3 ．固定
塗麵朝上，通過火焰2 ~ 3 次．此操作過程稱熱固定，其目的是使細胞質授固，以固定細胞形態，並便之牢固附著在載玻片上．
4 ．染色
將玻片平放於玻片擱架上，滴加染液於除片上（染液剛好覆蓋塗片薄膜為宜）.
5 ．水洗
倒去染液．用自來水衝洗，直至塗片上流下的水無色為止，
6 ，幹燥
自然幹燥，或用電吹風吹幹，也可用吸水紙吸千．
7 ，鏡檢
塗片幹後鏡檢．
塗片必須完全幹燥後才能用油鏡觀察.
五、實驗報告
1 ．結果
根據觀察結果，繪出兩種細菌的形態圖．
2 ．思考題
( 1) 你認為製備細菌染色標本時，尤其應該注意哪些環節？
( 2 ）為什麽要求製片完全幹燥後才能用油鏡觀察？
( 3 ）如果你的塗片未經熱固定，將會出現什麽問題？如果加熱溫度過高、時間太長，又會怎樣呢？
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