目的要求
1 ．學習並初步掌握革蘭氏染色法。
2 .了解革蘭氏染色法的原理及其在細菌分類鑒定中的重要性．
二、基本原理
革蘭氏染色法是1884 年由丹麥病理學家Christain Gram創立的，而後一些學者在此基礎上作了某些改進，革蘭氏染色法是細菌學中最重要的鑒別染色法，
革蘭氏染色法的基本步驟是：先用初染劑結晶紫進行染色，再用碘液媒染，然後用乙醇（或丙酮）脫色，最後用複染劑（如番紅）複染．經此方法染色後，細胞保留初染劑藍縈色的細菌為革蘭氏陽性菌；如果細胞中初染劑被脫色劑洗脫而使細菌染上複染劑的顏色（紅色）．該菌解於革蘭氏陰性菌．
革蘭氏染色法將細菌分為革蘭氏陽性和革蘭氏陰性，是由這兩類細菌細胞壁的結構和組成不同決定的．實際上，當用結晶紫初染後，像簡單染色法一樣，所有細菌都被染成初染荊的藍縈色．碘作為媒染劑，它能與結晶縈結合成結晶紫一碘的複合物，從而增強了染料與細菌的結合力甲當用脫色劑處理時，兩類細菌的脫色效果是不同的，革蘭氏陽性細菌的細胞壁主要由膚聚籍形成的網狀結構組成．壁厚、類脂質含量低，用乙醇（或丙酮）脫色時細胞壁脫水、使吠聚塘層的網狀結構孔徑縮小，透性降低，從而使結晶紫一腆的複合物不易被洗脫而保留在細胞內，經脫色和複染後仍保留初染劑的藍紫色．革蘭氏陰性菌則不同，由於其細胞壁膚聚糖層較薄、類脂含t 高．所以當脫色處理時，類脂質被乙醇〔 或丙酮）溶解，細胞壁透性增大，便結晶紫一碘的複合物比較容易被洗脫出來，用複染劑複染後，細胞被染上複染劑的紅色。
革蘭氏染色反應是細菌重要的鑒別特征，為保證染色結果的正確性，采用規範的染色方法是十分必要的．本實臉將介紹被普遙采用的H 成ker 氏改良的革蘭氏染色法．
三、器材
1 ．菌種大腸杆菌約24h 百養瓊脂斜麵培養物，金黃色葡萄球菌約24h 營養瓊脂斜麵培養物．蠟樣芽孢杆菌12~20h 營養瓊脂斜麵培養物。
2 ．染色劑革蘭氏染色液．
3 ．儀器或其他用具
四、操作步驟
1 ．製片
取苗種培養物常規塗片、幹燥、固定．
要用活暇生長翔的幼培葬臨作，蘭氏染色；塗片不宜過厚．以免脫色不憲全造成假陽性；火焰固定不宜過熱（以玻片不扭手為宜）.
2 ．初染
滴加結晶紫（以剛好將菌膜覆蓋為宜）染色1~2min，水洗。
3 ．媒染
用碘液衝去殘水，並用碘液覆蓋約1min，水洗．
4 ．脫色
用濾紙吸去玻片上的殘水，將玻片傾斜，在白色背景下．用滴管流加95 ％的乙醇脫色，直至流出的乙醇無紫色時，立即水洗。
5 ．複染
用番紅掖複染約2min，水洗．
6 ．鏡檢
幹燥後，用油鏡觀察．
菌體被染成藍紫色的是革蘭氏陽性菌，被染成紅色的為革蘭氏陰性菌．
7 ．混合塗片染色
按上述方法，在同一載玻片上．以大腸杆菌和蠟樣芽袍杆菌或大腸杆菌和金黃色葡萄苗作混合塗片染色、鏡檢進行比較。
五、實驗報告
1.結果
列表簡述3 株細菌的染色觀察結果（說明各菌的形狀頤色和革蘭氏染色反應〕 ，2 ．思考題
（1）你認為哪些環節會影響革蘭氏染色結果的正確性？其中最關鍵的環節是什麽？
（2）現有一株細菌寬度明顯大於大腸杆菌的粗壯杆菌，請你鑒定其革蘭氏染色反應．你怎樣運用大腸杆國和金黃色葡萄球菌為對照菌株進行塗片染色，以證明你的染色結果正確性．
( 3 ）你的染色結果是否正確？如果不正確，請說明原因。
( 4 ）進行革蘭氏染色時，為什麽特別強調菌齡不能太老，用老齡細菌染色會出現什麽問題？
( 5 ）革蘭氏染色時，初染前能加碘液嗎？乙醇脫色後複染之前，革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌應分別是什麽顏色？
（6）你認為革蘭氏染色中，哪一個步腳可以省去而不影響最終結果？在什麽情況下可以采用？
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