1.以無菌操作方式開啟凍幹菌種管，加入適量培養液（按菌種選擇培養液，如細菌選擇營養肉湯、白色念珠菌選擇沙堡液體培養基、分枝杆菌選擇蘇通綜合液體培養基、黑曲黴菌選擇麥芽浸膏營養肉湯培養基），吹吸數次，使菌種融化分散。取含5.0 mL～10.0 mL相應培養液的試管，滴入少許菌種懸液，在適宜溫度下培養至規定時間（一般為36 ℃±1 ℃培養18 h～24 h、黑曲黴菌為30 ℃± 1℃培養42 h～48 h），此為第1代培養物。
2.用接種環取第1代培養物，或從菌種凍存管中取適量菌液/瓷珠，劃線接種於相應培養基平板（按菌種選擇培養基，如細菌選擇營養瓊脂培養基、白色念珠菌選擇沙堡瓊脂培養基、分枝杆菌選擇改良羅氏培養基或其他商品化分枝杆菌專用複合瓊脂培養基、黑曲黴菌選擇麥芽浸膏瓊脂培養基），在適宜溫度下培養至規定時間（一般為36 ℃±1 ℃培養18 h～24 h、分枝杆菌36 ℃± 1℃培養72 h、黑曲黴菌30 ℃±1 ℃培養42 h～48 h），此為第2代培養物。
3.挑取第2代培養物中典型菌落，接種於相應培養基斜麵或平板（按菌種選擇培養基斜麵，如細菌選擇營養瓊脂斜麵、白色念珠菌選擇沙堡瓊脂斜麵、分枝杆菌選擇改良羅氏培養基或其他商品化分枝杆菌專用複合瓊脂斜麵、黑曲黴菌選擇麥芽浸膏瓊脂培養基平板），在適宜溫度下培養至規定時間（一般為36 ℃±1 ℃培養18 h～24 h、分枝杆菌36 ℃±1 ℃培養72 h、黑曲黴菌30 ℃±1 ℃培養42 h～48 h），此為第3代培養物。
4.取第3代培養物，接種於相應培養基斜麵，在適宜溫度下培養至規定時間，此為第4代培養物。5.1.5 按上述方法培養至所需代數，傳代時在試管上注明菌種名稱、菌種號、代數及傳代日期等基本信息。
本文節選自中華人民共和國衛生行業標準《WS/T 683—2020消毒試驗用微生物要求》
