一、目的和要求
1 、明確培養基的配製原理，掌握配製培養基的方法和步驟
2、學習開掌握高壓蒸汽滅菌的基本原理及操作方法
3、學習空器皿的包紮、棉塞的製作等實驗前準備工作
二、原理
培養基：培養基是人工地將多種營養物質按照各種微生物生長的需要配製而成的一種混合營養物質，用以培養或分離各種微生物。
牛肉膏蛋白腖培養基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養基，有時又稱為普通培養基，由於這種培養基中含有一般細菌生長繁殖所需要的最基本的營養物質，所以可供作微生物生長繁殖之用。基礎培養基含有牛肉膏，蛋白腖和NaCl。其中牛肉膏為微生物提供碳源、能源、磷酸鹽和維生素，蛋白腖主要提供氮源和維生素，而NaCl提供無機鹽。由於這種培養基多用於培養細菌，因此要用稀酸或稀堿將其pH調至中性或微堿性，以利於細菌的生長繁殖。
按照培養基的物理狀態，可將培養基分為：固體培養基、半固體培養基、液體培養基。
在液體培養基中加入凝固劑，如瓊脂、明膠、矽膠等，即為固體培養基。以瓊脂為例，一般固體培養基中，加入1.5%-2.0%。
在液體培養基中加入少量凝固劑即為半固體培養基。一般瓊脂隻需要加入0.2%-0.7%。
已經配製好的培養基必須立即滅菌，以防止其中的微生物生長而消耗營養成分和改變培養基的pH。
高壓蒸汽滅菌：
是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內的冷空氣從排氣閥中驅盡，然後關閉排氣閥，繼續加熱，此時由於蒸汽不能溢出，而增加了滅菌器內的壓力，從而使沸點增高，得到高於100℃的溫度。導致菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。
在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比幹熱大，其原因有三：一是濕熱中細菌菌體吸收水分，蛋白質較易凝固，因蛋白質含水量增加，所需凝固溫度降低（表Ⅵ-2），二是濕熱的穿透力比幹熱大（表Ⅵ-3）；三是濕熱的蒸汽有潛熱存在，每1克水在100℃時，由氣態變為液態時可放出2．26kJ（千焦）的熱量。這種潛熱，能迅速提高被滅菌物體的溫度，從而增加滅菌效力。
三、具體操作：
培養基的配製方法和步驟及注意事項
1.先在空燒瓶中加入所要配製總量的50%左右的水（合成培養基）。
2、稱量：
▲未稱的藥品與稱過的藥品要分開來
▲藥勺用完要洗幹淨放回原處，一種試劑用一把勺
▲按照配方正確稱取各種原料放於燒杯中。若是合成培養基，各成份要逐一溶解。
▲稱不溶性固形物時，應單獨稱，若量少的可以與無機鹽一起稱，但一定要混勻再分裝。
3、溶化：
▲玻棒攪勻，加熱溶解，最後定容
▲定容：可先加少量水溶解，倒入量筒，再補水到刻度
▲一般情況下培養基用自來水配製。
4、調pH值：用1N NaOH或1N HCl調pH，用pH試紙對照。不可反複調pH，否則會影響培養基的滲透壓。
5、加瓊脂粉：分裝過程中要不斷攪拌，以使每管的瓊脂粉都能均勻。
6、分裝：試管總長的1/4，三角瓶的1/2（裝量指固體培養基）。注意不要汙染棉塞、試管口。
7、 包紮：試管和三角燒瓶分別塞上棉塞並包上牛皮紙，包紮成捆，注明何種培養基、時間。
8、 滅菌備用：
▲培養基不能反複高溫滅菌，否則會破壞其中的營養成分。
▲培養基滅菌後必須在35-370C下恒溫培養24h，確定無菌生長，方可使用。
高壓蒸汽滅菌步驟及注意點：
1．首先將內層滅菌桶取出，再向外層鍋內加入適量的水。
2．放回滅菌桶，並裝入待滅菌物品。
3．加蓋，以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓。
4．水沸騰以排除鍋內的冷空氣。待冷空氣完全排盡後，關上排氣閥。
5、當鍋內壓力升到所需壓力時，控製熱源，維持壓力至所需時間。本實驗用 1．05kg/cm2，121．3℃，20分鍾滅菌。
5．滅菌所需時間到後，切斷電源或關閉煤氣，讓滅菌鍋內溫度自然下降，當壓力表的壓力降至0時，打開排氣閥，旋鬆螺栓，打開蓋子，
6．將取出的滅菌培養基放入 37℃溫箱培養24小時，經檢查若無雜菌生長，即可待用。
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