二、細胞數的測定
測定細胞數目的方法很多,下麵介紹幾種常用的方法:
1、顯微直接計數法
在顯微鏡下直接進行計數,常利用血球計數板進行計數。血球計數板是一塊特製
的載玻片。計數在載玻片上的計數室內進行。由於其體積一定(0.1mm8),而且菌液濃度已知,這樣計數出來 的數字,通過換算,可測知樣品裏單位體積中的微生物總數目。該方法的優點是直觀、快速,但死活不分,測定出來的結果是總菌數。
在條件較差的地方,如果沒有血球計數板,也可以采用定麵積塗布法或比例計數法來測定總菌數,其中又以比例計數法較為簡便。它是將待測細菌菌液與等體積血液混合塗片,在顯微鏡下測得細菌數與紅細胞數的比例。由於每毫升血液中紅細胞數是已知的,根據比例可大致測知樣品中的細菌數。
2、平板菌落計數法
平板菌落計數法是實踐中最常用的一種方法。它的做法是:將稀釋後的一定量的已知濃度的菌液與熔化的固體培養基混合( 45攝氏度左右 ),搖勻、靜置、凝 固、培養,然後計數其菌落數目。一般情況下,認為每個菌落代表一個活菌,這樣換算以後可測知樣品中活菌數目。這個方法常用來測定牛乳、食品、水及其他材料中的含菌數。有些細菌如無法在固體培養基 內生長或有其他原因,可用液體稀釋法,借助於統計學也可判斷其活菌數。“最可能數目MPN是統計法在生物學的應用。通過查MPN可測知樣品中活菌的可能數目。
3、薄膜過濾計數法
這種方法適用於測定量大但含菌數少的樣品,如水、空氣等。水等樣品通過微孔薄膜(如硝化纖維素薄膜)過濾後,將黏附有細菌的膜放在培養基表麵或浸透了培養液的支持物表麵,進行培養,然後計數菌落來推算樣品中的含菌量。
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