一、孟加拉紅培養基用途
用於食品中黴菌和酵母菌總數的測定。
黴菌（Mould）是非分類學名詞，是對菌絲體發達，而又不產生大型肉質子實體的絲狀真菌的俗稱。按照Smith分類係統，黴菌分屬於真菌界、子囊菌綱和半知菌類。在自然界分布廣泛，無所不在，而且種類和數量驚人。黴菌的菌落大、疏鬆、幹燥、不透明，有的呈絨毛狀或絮狀或網狀，菌體可沿培養基表麵蔓延生長，由於不同的真菌孢子含有不同的色素，所以菌落可呈現紅、黃、綠、青綠、青灰、黑、白、灰等多種顏色。
酵母（Yeast）是非分類學術語，泛指能發酵各種糖類的各種單細胞真菌，不同的酵母菌在進化和分類地位上有異源性。一些酵母菌能夠通過出芽的方式進行無性生殖，也可以通過形成孢子的形式進行有性生殖。目前已知有500多種酵母，大部分被分類到子囊菌門。
黴菌和酵母菌可以造成許多食物的腐敗，原因在於黴菌和酵母菌寬泛的環境適應力。大多數黴菌和酵母菌是專性需氧菌，需要遊離氧氣進行生長。對酸堿度要求較低，從pH值2.0到高於pH值9.0均可生長。生長溫度範圍10℃～35℃，最適生長溫度25℃～28℃。
二、培養基配方（g/L）：
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蛋白腖 |
5.0 |
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葡萄糖 |
10.0 |
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磷酸二氫鉀 |
1.0 |
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硫酸鎂 |
0.5 |
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孟加拉紅 |
0.033 |
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氯黴素 |
0.1 |
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瓊脂 |
20.0 |
三、培養基原理
蛋白腖作為培養基中的營養物質，提供菌體生長所需的氮源等；葡萄糖提供微生物生長所需的碳源，自然界中大多數微生物都能利用葡萄糖，由於細菌代謝過程中分解代謝葡萄糖產酸，培養及加熱滅菌時葡萄糖被破壞焦化，因此應注意其用量及滅菌時間和溫度；磷酸二氫鉀作為培養基的緩衝劑；硫酸鎂能夠促進菌體細胞的生長；孟加拉紅可抑製細菌的生長，也可抑製繁殖過快的黴菌菌落的大小和高度，此外還可作為著色劑，黴菌或酵母菌吸收後便於菌落的觀察；氯黴素作為抗生素可抑製細菌的生長；瓊脂為培養基的凝固劑。
四、質控菌株
在GB4789.28-2013培養基和試劑的質量要求中關於孟加拉紅培養基的質量控製標準如下表所示：
表1孟加拉紅培養基的質量控製標準
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質控菌株 |
菌株編號 |
參比或計數培養基 |
方法 |
質控結果 |
其他特征 |
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釀酒酵母 |
ATCC 9763 |
SDA |
定量 |
PR≥0.7 |
奶油色菌落 |
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黑曲黴 |
ATCC 16404 |
SDA |
定量 |
PR≥0.7 |
白色菌絲，黑色孢子 |
|
大腸埃希氏菌 |
ATCC 25922 |
/ |
半定量 |
G≤1 |
/ |
|
金黃色葡萄球菌 |
ATCC 6538 |
/ |
半定量 |
G≤1 |
/ |
為了更好地對培養基進行質量控製，從實驗室中選取5株釀酒酵母和7株黑曲黴、6株大腸埃希氏菌和8株金黃色葡萄球菌進行檢驗。
具體菌株信息如下表所示：
表2孟加拉紅培養基的質控菌株
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菌株名稱 |
菌株編號 |
菌株名稱 |
菌株編號 |
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釀酒酵母 |
ATCC 9763 |
黑曲黴 |
ATCC 16404 |
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CMCC 98017 |
CMCC 98020 |
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CMCC 98018 |
CMCC 98021 |
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CMCC 98019 |
CMCC 98022 |
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CMCC 98023 |
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CICC 1425 |
CMCC 98024 |
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CICC 2089 |
|||
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大腸埃希氏菌 |
ATCC 25922 |
金黃色葡萄球菌 |
ATCC 6538 |
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CMCC 43201 |
CMCC 26302 |
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CMCC 43203 |
CMCC 26305 |
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CMCC 43204 |
CMCC 26304 |
||
|
CMCC 43205 |
CMCC 26307 |
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CMCC 26306 |
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CICC 24652 |
CICC 10145 |
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CICC 10790 |
五、培養基質控檢驗方法：
1.稱取本品36.6g，加熱攪拌溶解於1000mL蒸餾水中，分裝三角瓶，121℃高壓滅菌15分鍾，冷卻至45-50℃備用；
2.將新活化的目標菌（釀酒酵母和黑曲黴）用生理鹽水進行10倍梯度係列稀釋；吸取適宜稀釋度的質控菌液1mL加入至無菌空平皿中，加入約10-15mL孟加拉紅瓊脂搖勻，凝固後覆蓋約5mL孟加拉紅瓊脂，每株菌接種3個平板，同時傾注3個SDA平板做參比培養基計數，待培養基凝固；
3.挑取非目標菌（大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌）至TSB試管中，過夜培養；使用1μL接種環挑取1環菌液，劃六線接種於孟加拉紅瓊脂平板，每株菌接種3個平板；
4.將平板倒置於恒溫培養箱內，28±1℃需氧培養5d，記錄試驗結果。
六、培養基質控試驗結果
1.7株黑曲黴在孟加拉紅培養基上28±1℃需氧培養5d後，均有黑色孢子產生，回收率在90%以上。
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黑曲黴ATCC 16404 |
黑曲黴CICC 2089 |
黑曲黴CMCC 98020 |
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黑曲黴CMCC 98021 |
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黑曲黴CMCC 98022 |
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黑曲黴CMCC 98023 |
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黑曲黴CMCC 98024 |
2.5株釀酒酵母在孟加拉紅培養基上28±1℃需氧培養5d後，為奶白色菌落，回收率均在90%以上。
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釀酒酵母CICC 1425 |
釀酒酵母ATCC 9763 |
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釀酒酵母CMCC 98017 |
釀酒酵母CMCC 98018 |
釀酒酵母CMCC 98019 |
3.本培養基要求抑製大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌的生長，大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌在培養基上劃六線28±1℃需氧培養5d後，均未生長，符合標準要求，計數菌株生長指數G值結果如下表所示：
表3非目標菌生長指數G值計數結果
菌株名稱
菌株編號
孟加拉紅培養基
平皿1
平皿2
平皿3
大腸埃希氏菌
ATCC 25922
0
0
0
CMCC 43201
0
0
0
CMCC 43203
0
0
0
CMCC 43204
0
0
0
CMCC 43205
0
0
0
CICC 24652
0
0
0
金黃色葡萄球菌
ATCC 6538
0
0
0
CMCC 26302
0
0
0
CMCC 26305
0
0
0
CMCC 26304
0
0
0
CMCC 26307
0
0
0
CMCC 26306
0
0
0
CICC 10145
0
0
0
CICC 10790
0
0
0
七、參考文獻
[1]GB 4789.28-2013 食品微生物學檢驗 培養基和試劑的質量要求.
[2]GB 4789.15-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 黴菌和酵母計數.
[3]趙貴明. 微生物培養基及其原材料質量控製. 北京中國標準出版社，2018.1.
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