一、幹熱滅菌
常用於耐熱器皿的滅菌,如移液管、玻璃平皿、玻璃試管或金屬器皿等,可在170℃滅菌2-4h或200℃滅菌0.5-1h。接種環、接種針、塗布棒等實驗器材可在酒精燈上直接進行灼燒滅菌。
滅菌效果:滅菌效果強,可殺滅包括芽孢在內的所有微生物。
注意事項:
1.幹熱滅菌過程的熱穿透效果差且比較慢,因此在烘箱內進行幹熱滅菌時,不可擺放過滿;
2.塑料、橡膠等不耐熱材質不可采用此方法滅菌;
3.紙張、棉花滅菌溫度不能超過170℃;製備好的培養基不可采用此方法滅菌。
二、高壓蒸汽滅菌(濕熱滅菌)
常用於實驗室多數培養基滅菌,也可用於玻璃器皿、金屬器皿的滅菌。一般采用121℃高壓滅菌15-20min或116℃高壓滅菌30min,根據培養基不同可對滅菌參數進行調整。
滅菌效果:可殺滅包括芽孢在內的所有微生物。
注意事項:
1.滅菌鍋效力不達標、滅菌過程冷空氣未排淨、培養基本身含芽孢過多、滅菌方式不正確、滅菌鍋內物品擺放過滿都有可能導致滅菌失敗;
2.在進行容器滅菌時,容器不可密封,需與滅菌鍋內空氣流通。
三、水浴/加熱/流動蒸汽滅菌
常用於含不耐熱成分的培養基滅菌,如XLD瓊脂、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液、亞硫酸鉍瓊脂等。采用流動蒸汽方式滅菌的培養基,如沒有相應的流動蒸汽滅菌設備,可采用水浴加熱方式或“蒸”的方式滅菌。
滅菌效果:可殺滅微生物繁殖體,不能殺滅芽孢體,采用此類方式滅菌的培養基通常具有強抑菌性,或要求短時間內使用。
注意事項:
1.不同培養基成分耐熱性有差別,加熱時應當注意,如含亞硒酸鹽的培養基(SC、SBG等)加熱至90℃左右即可,加熱過度會使亞硒酸氫鈉分解,培養基變紅,含瓊脂的培養基可加熱煮沸4-6次或沸水浴20-30min使瓊脂完全溶解即可;
2.采用加熱滅菌方式的培養基,通常含有不穩定成分,建議現配現用或按標準規定的期限使用,如不立即使用,可置於低溫或陰涼(2-8℃或10-20℃)處避光保存。
四、過濾除菌
常用於抗生素或含不耐熱成分培養基的滅菌,一般使用0.22μm孔徑的微孔濾膜或濾芯進行過濾除菌。實驗室製取無菌空氣也可采用此方法,使用特殊濾芯或濾網對空氣進行過濾除菌。
滅菌效果:可除去普通細菌、真菌及芽孢體,但不能除去支原體、病毒等體積微小生物。
注意事項:
1.使用前通常需按照說明書使濾膜或濾芯浸濕;
2.注意過濾速度和體積,需嚴格按照過濾器或濾膜說明使用,速度過快或過濾體積超標都有可能導致濾膜破損,除菌失敗;
3.黏度較大或有沉澱的培養基不適合用此方式除菌。
五、輻照滅菌
微波、紫外線、X射線和γ射線等均可用於滅菌。γ射線穿透力強,滅菌效果好,被廣泛應用於食品、藥品行業產品滅菌,也常用於微生物培養基、實驗器材滅菌。一些特殊培養基或添加劑成分因不適合高溫蒸汽滅菌、過濾除菌等方法,可采用γ射線輻照滅菌。紫外線殺菌效果較弱,幾乎沒有穿透力,通常僅用於實驗室空氣或物體表麵殺菌。
滅菌效果:γ射線滅菌效果好,穿透力強,可殺死包括芽孢體在內的所有微生物。
注意事項:
1.並非所有培養基都可以采用γ射線輻照滅菌方式,一些染料或不穩定成分經輻照後會發生變化;
2.γ射線會對瓊脂造成一定程度破壞,因此在進行固體培養基滅菌時,需對輻照劑量和瓊脂添加量進行適當調整;
3.玻璃製品、金屬製品一般不可采用此方法滅菌。
六、化學試劑滅菌
常用環氧乙烷滅菌,以及各類消毒劑浸泡滅菌。環氧乙烷曾廣泛用於平皿、一次性醫療產品的滅菌,但由於對環境汙染較大,滅過菌的產品需長時間放置使環氧乙烷消散,現已逐步被其他滅菌方式取代。
滅菌效果:不同消毒劑殺滅效果存在差異,大致上可分為低效消毒劑、中效消毒劑和高效消毒劑。環氧乙烷屬於高效消毒劑,可殺滅包含芽孢在內的所有微生物。
注意事項:
1.此類滅菌方式通常會有殘留,且對環境有汙染,因此一般不適合用於直接進行微生物培養相關器皿滅菌;
2.殺菌能力越強的消毒劑,刺激性、腐蝕性、毒性往往越大,使用時需注意防護。
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