一、參考標準
《SN/T 2206.3-2009 中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業標準 化妝品微生物檢驗方法 第3部分：肺炎克雷伯氏菌》。
二、生物學特征
革蘭氏陰性杆菌，為較短粗的杆菌，大小0.5～0.8×1～2 um，單獨、成雙或短鏈狀排列。無芽胞，無鞭毛，有較厚的莢膜，多數有菌毛。營養要求不高，在普通瓊脂培養基上形成較大的灰白色粘液菌落，以接種環挑之，易拉成絲，有助鑒別。在腸道杆菌選擇性培養基上能發酵乳糖，呈現有色菌落。
三、檢驗程序
圖1 肺炎克雷伯氏菌檢驗程序
四、檢驗方法及結果
1、增菌
肺炎克雷伯氏菌在SCDLP液體培養基中36±1℃培養18-24h後生長渾濁。如圖2所示。
a:空白對照 b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117
圖2 SCDLP液體培養基培養結果
2、選擇性分離
自SCDLP培養液中，取1-2接種環，劃線接種於膽硫乳瓊脂平板（DHL）上，置36±1℃ 培養18-24 h。
在DHL平板上肺炎克雷伯氏菌菌落呈淡粉紅色，大而隆起，光滑濕潤，粘液狀，相鄰菌落容易融合成膿汁樣，接種針挑取菌落時呈絲狀粘連。如圖3所示。
圖3 肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117在DHL平板上的培養結果
五、初步生化鑒定
從DHL平板上至少挑取5個典型或可疑菌落，如果平板上可疑菌落少於5個，則全部挑取，把挑取的可疑菌落分別穿刺於動力半固體瓊脂，並接種到營養瓊脂斜麵培養基，36±１℃培養18-24 h。將營養瓊脂斜麵培養基上的純培養物做革蘭氏染色、氧化酶試驗。
1、動力半固體瓊脂
肺炎克雷伯氏菌在動力半固體培養基中無動力，延穿刺線生長。如圖4所示，相比較大腸埃希氏菌在動力半固體培養基中有動力，呈擴散生長，培養基會出現渾濁現象。
a:大腸埃希氏菌ATCC 25922 b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117
圖4 動力半固體培養基培養結果
2、革蘭氏染色
肺炎克雷伯氏菌染色結果為紅色，為革蘭氏陰性菌。
圖5
3、氧化酶試驗
肺炎克雷伯氏菌氧化酶試驗不變色，為陰性。如圖6所示，相比較銅綠假單胞菌變藍為陽性。
a:銅綠假單胞菌ATCC 9027 b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117
圖6 氧化酶試驗結果
六、後續生化鑒定
挑取無動力，革蘭氏染色陰性，氧化酶試驗陰性的菌進行後續生化鑒定。
1、尿素酶試驗
劃線接種於尿素酶生化管培養基中，培養基變為粉紅色，為陽性。相比較鼠傷寒沙門氏菌不變色，為陰性。
a:空白對照 b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117 c:鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028
圖7 尿素酶鑒定試驗結果
2、靛基質生化鑒定試驗
將菌接種於胰蛋白水培養基中，36±1℃培養24±2h。培養結束後，滴加Kovacs氏靛基質試劑2-4滴，立即觀察現象。肺炎克雷伯氏菌為黃色環，為陰性。相比較大腸埃希氏菌為玫紅色環，為陽性。
a:空白對照 b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117 c:大腸埃希氏菌ATCC25922
圖8 靛基質鑒定試驗結果
3、MR鑒定試驗
用MR-VP培養基培養結束後，滴加甲基紅試劑，立即觀察現象，肺炎克雷伯氏菌顯黃色，為陰性。相比較大腸埃希氏菌顯紅色，為陽性。
a:空白對照 b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117 c:大腸埃希氏菌ATCC25922
圖9 MR鑒定試驗結果
4、V-P鑒定試驗
用MR-VP培養基培養結束後，滴加V-P試劑，繼續培養0.5-4 h，觀察現象。肺炎克雷伯氏菌變紅，為陽性。相比較大腸埃希氏菌為黃色，為陰性。
a:空白對照 b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117 c:大腸埃希氏菌ATCC25922
圖10 V-P鑒定試驗結果
5、西蒙氏枸櫞酸鹽利用試驗
劃線接種於西蒙氏枸櫞酸鹽培養基上，培養基變藍，為陽性。
a:空白對照 b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117
圖11 西蒙氏枸櫞酸鹽培養基培養結果
6、賴氨酸脫羧酶鑒定試驗
接種於賴氨酸脫羧酶肉湯生化管中，用無菌液體石蠟覆蓋培養基液麵，培養18-24 h。觀察現象，肺炎克雷伯氏菌培養基呈紫色，為陽性。相比較，福氏誌賀氏菌培養基呈黃色，為陰性。
a:空白對照 b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117 c:福氏誌賀氏菌ATCC12022
圖12 賴氨酸脫羧酶鑒定試驗結果
注：肺炎克雷伯氏菌生化特性見下表。
注：本文屬betway必威西汉姆联生物原創，未經允許不得轉載。
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