抗生素檢定培養基I號（低pH）實驗及注意事項

一、用途

 本產品符合中國藥典標準，用於磺苄青黴素效價測定。

二、檢驗原理

 本法是利用抗生素在瓊脂培養基內的擴散作用，抑菌圈直徑與抗生素的濃度或活性相關；比較標準品與供試品兩者對接種的試驗菌產生抑菌圈的大小，以測定供試品效價的一種方法。

三、培養基配方（g/L）

此配方可以進行改良或增加營養成分以獲得最佳的結果

四、操作步驟

 1、稱取本品26.0g，加熱攪拌溶解於1000ml純化水中，116℃高壓滅菌20分鍾，備用；

 2、菌懸液的製備。枯草芽孢杆菌（CMCC(B)63501）：取枯草芽孢杆菌（CMCC(B)63501）的營養瓊脂斜麵培養物，接種於盛有營養瓊脂培養基的培養瓶中，在35-37℃培養7日，用革蘭氏染色法塗片鏡檢，應有芽孢85%以上。用滅菌水將芽孢洗下，在65℃加熱30分鍾，備用；

 3、取平板分別注入加熱融化的培養基20ml，放置水平台麵上使凝固，作為底層。另取培養基適量培養基，放冷至48-50℃加入規定的試驗菌懸液適量，搖勻。在平板中分別加入5ml，使在底層上均勻攤布，作為菌層，放置在水平台上冷卻凝固。

 4、在平板中放置牛津杯。用無菌鑷子夾住HB四連式牛津杯正麵的凸點，將其放置在菌層培養基表麵上，如圖1；將壓杯板蓋上，壓住牛津杯5秒左右，使4個小杯與培養基表麵緊密接觸，防止出現縫隙導致漏液，然後小心拿走壓杯板。如圖2。

圖1	圖2

 5、在每一平板中小管中分別滴加標準品溶液，如圖3；轉移至培養箱35-37℃培養14-16小時，記錄實驗結果。如圖4。

圖3	圖4

五、微生物試驗

 接種以下質控菌株，在36±1℃培養14-16小時：

質控菌株	菌株編號	接種量(CFU)	生長情況	其他特征
枯草芽孢杆菌	CMCC(B)63501	/	+++	抑菌圈大小18mm-22mm

  抗生素檢定培養基I號（低pH）質控結果：

六、注意事項

 1、注入培養基總量不大於20ml，否則放置牛津杯後平皿蓋無法蓋緊。

 2、菌量濃度適宜，若菌量濃度過小，則菌層生長弱做不出抑菌圈。

 3、菌層培養基表麵一定要平整，否則會導致牛津杯漏液。

 4、HB四連式牛津杯中央有凸點且平衡翼上標有“betway必威西汉姆联生物”字體的為產品正麵。

 5、壓杯板已經輻照滅菌，可以直接使用；多次使用，可用酒精棉擦拭即可。

 6、將平皿轉移至培養箱培養過程中輕拿輕放，避免劇烈震動，不要堆置培養，以免影響實驗效果。

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