PYG液體培養基的原理及實驗方法

一、培養基用途

 該培養基主要用於雙歧杆菌的增菌培養。

二、培養基配方（g/L)

蛋白腖	20.0
葡萄糖	5.0
酵母浸粉	10.0
氯化鈉	0.08
半胱氨酸鹽酸鹽	0.5
氯化鈣	0.008
硫酸鎂	0.008
磷酸氫二鉀	0.04
磷酸二氫鉀	0.04
碳酸氫鈉	0.4
pH值6.0±0.1	25℃

三、檢驗原理

 蛋白腖、酵母浸粉提供氮源、維生素和生長因子；葡萄糖為可發酵糖類；半胱氨酸鹽酸鹽、維生素K1、氯化血紅素、硫酸鎂、氯化鈣、氯化鈉、碳酸氫鈉為培養各種雙歧杆菌提供生長因子；磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀為緩衝劑。

四、試驗方法

 1.稱取本品18.04g，加熱溶解於500ml蒸餾水中，121℃高壓滅菌15分鍾，冷至50℃左右時，加入過濾除菌的維生素K1溶液0.5ml和氯化血紅素溶液(5mg/ml)2.5ml，混勻，備用。

 2.在無菌環境中，用10ml移液槍吸取備用的PYG液體培養基加到無菌空試管中，每支10ml，共六支。

 3.將質控菌株稀釋至合適梯度，用移液槍吸取質控菌種100微升，加到分裝好的試管中，並立即在試管中加入適量無菌液體石蠟。

 4.將培養基放置於36±1℃厭氧環境中培養48小時，觀察和記錄實驗結果。

五、試驗結果

 接種以下質控菌株，放置於36±1℃厭氧環境中培養48小時。

 PYG液體培養基試驗結果：

a:長雙歧杆菌b:嬰兒雙歧杆菌c：空白對照

六、注意事項

 1.雙歧杆菌為厭氧菌，稀釋質控菌株到試驗完成，整個過程控製在15min之內。

 2.雙歧杆菌為厭氧菌，在液體培養基中接入質控菌種後應加入適量無菌液體石蠟以隔絕空氣或放入其他厭氧環境中。

 3.維生素K1溶液配製方法:稱取維生素K1 1g，加入無水乙醇99ml，過濾除菌。氯化血紅素溶液配製方法:稱取氯化血紅素0.5g溶於1mol/L氫氧化鈉溶液1ml中加蒸餾水至100ml，121℃高壓滅菌15min-20min，冰箱保存。  

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