一、試驗原理
TCBS瓊脂用於致病性弧菌的選擇性分離(GB、SN標準)。成分中的酵母浸粉、蛋白腖提供菌體生長所需的氮源、碳源及維生素等各種生長因子;較高濃度的氯化鈉提供了弧菌嗜鹽生長的環境,其形成的高滲透壓抑製了其他細菌的生長;蔗糖是可發酵碳源;枸櫞酸鈉、高pH堿性環境及硫代硫酸鈉的存在抑製腸道菌的生長,另硫代硫酸鈉還提供硫源,在檸檬酸鐵存在的條件下可以檢測細菌產硫化氫;牛膽粉、牛膽酸鈉主要抑製革蘭氏陽性菌的生長;溴麝香草酚蘭和麝香草酚蘭作為酸堿指示劑,在該平板上生長的細菌若能利用蔗糖產酸,則使得混合指示劑(溴麝香草酚蘭和麝香草酚蘭)的顏色變成黃色;瓊脂起凝固的作用。
二、培養基配方(g/L)
酵母浸粉 |
5.0 |
蛋白腖 |
10.0 |
硫代硫酸鈉 |
10.0 |
枸櫞酸鈉 |
10.0 |
牛膽粉 |
5.0 |
牛膽酸鈉 |
3.0 |
蔗糖 |
20.0 |
氯化鈉 |
10.0 |
檸檬酸鐵 |
1.0 |
溴麝香草酚蘭 |
0.04 |
麝香草酚蘭 |
0.04 |
瓊脂 |
15.0 |
pH值8.5-8.7 | 25℃ |
三、試驗方法
1.稱取本品89g,煮沸溶解於1000mL蒸餾水(可根據培養需要擴大或縮小產品用量),冷至45-50℃,傾入無菌平皿,備用;
2.質控菌液按國標等標準或其它方法製備而成;
3.取相應菌液按塗布或劃線方式接種於培養基中;
4.將接好菌的平板倒置放入恒溫培養箱,於36±1℃需氧培養18-24h,觀察實驗結果。
四、試驗結果判斷
1.外觀
此培養基煮沸滅菌後製備好的固體平板為綠色。
2.生物學實驗
接種以下質控菌株,放入培養箱中,於36±1℃培養24±2h,觀察試驗結果。
質控菌株 |
菌株編號 |
接種量(CFU) |
參比或計數培養基 |
方法 |
質控情況 |
副溶血性弧菌 |
ATCC17802 |
20-200 |
3%NaCl TSA |
定量 |
PR≥0.2,藍綠色鬥笠狀菌落,H2S陰性 |
溶藻弧菌 |
ATCC33787 |
20-200 |
3%NaCl TSA |
定量 |
PR≥0.2,黃色菌落,H2S陰性 |
霍亂弧菌 |
/ |
20-200 |
3%NaCl TSA |
定量 |
PR≥0.2,黃色菌落,H2S陰性 |
金黃色葡萄球菌 |
ATCC25923 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤1 |
大腸埃希氏菌 |
ATCC25922 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤1 |
TCBS瓊脂微生物質控結果:
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副溶血性弧菌 藍綠色鬥笠狀菌落,H2S陰性 |
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溶藻弧菌 黃色菌落,H2S陰性 |
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霍亂弧菌 黃色菌落,H2S陰性 |
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