一、培養基用途及原理
用於藥品中耐膽鹽革蘭氏陰性菌的檢驗。
明膠胰酶水解物、酵母浸出粉提供細菌生長的基本營養,脫氧膽酸鈉可抑製革蘭氏陽性菌的生長,在酸性條件下脫氧膽酸鹽可沉澱析出;結晶紫可抑製革蘭氏陽性菌及部分真菌的生長;葡萄糖為唯一碳源,氯化鈉維持滲透壓,瓊脂為凝固劑,中性紅為酸堿指示劑,酸性條件下為紅色,堿性條件下為橙黃色。
耐膽鹽革蘭氏陰性菌可在此培養基中生長,部分細菌可分解葡萄糖產酸,菌落顯桃紅色,周圍有膽鹽沉澱環,產酸弱或不產酸的細菌可呈現淡紅色或橙黃色,菌落周圍通常沒有沉澱環。
二、培養基配方(g/L)
明膠胰酶水解物 |
7.0 |
酵母浸出粉 |
3.0 |
脫氧膽酸鈉 |
1.5 |
葡萄糖 |
10.0 |
氯化鈉 |
5.0 |
中性紅 |
0.03 |
結晶紫 |
0.002 |
瓊脂 |
15.0 |
pH7.4±0.2 | 25℃ |
三、試驗方法
1、稱取本品41.5g,加熱溶解於1000ml蒸餾水中,煮沸不要超過2分鍾,無需高壓滅菌。冷卻至50℃左右時,混勻傾入無菌平皿,臨用時製備不得超過3小時。製備好的平板保存於2-8℃,應避免光線直接照射。幹燥培養基應放置於陰暗幹燥處,室溫保存。使用前,把製備好的平板放置室溫10-20分鍾。
2、製備質控菌液。
3、選擇合適稀釋度的目標菌質控菌液0.1ml,均勻塗布於平板上,每一稀釋度接種兩個平板。
4、30-35℃倒置培養基培養18-24小時,記錄實驗結果。
四、結果觀察與解釋
接種以下質控菌株,30-35℃倒置培養基培養18-24小時:
質控菌株 |
菌株編號 |
接種量(CFU) |
生長情況 |
回收率 |
其他特征 |
大腸埃希氏菌 |
CMCC(B)44102 |
10-100 |
+++ |
≥70% |
紅色菌落,有膽鹽沉澱環 |
金黃色葡萄球菌 |
CMCC(B)26003 |
/ |
- |
/ |
抑製 |
銅綠假單胞菌 |
CMCC(B)10104 |
10-100 |
+++ |
≥70% |
淡紅色菌落至橙黃色菌落 |
紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂微生物質控結果:
|
|
|
|
|
銅綠假單胞菌 淡紅色菌落至橙黃色菌落 |
|
大腸埃希氏菌 紅色菌落,有膽鹽沉澱環 |
|
金黃色葡萄球菌 抑製 |
五、注意事項
本培養基僅為細菌鑒定的一部分,需做其他補充試驗。
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