一、盲樣考核簡介
盲樣考核，是指將未知詳細樣品信息的待測樣品發放給相關檢測機構，要求檢測員在指定時間內、完成特定樣品檢測項目並提供相應報告的一種考核形式。盲樣考核作為實驗室質量控製的重要環節，可直接、客觀地反映實驗室檢測能力，也是實驗室水平的重要體現。
對從事檢驗檢測的行業同仁來說，盲樣檢測是必須掌握的專業技能之一。尤其對於CMA或CNAS認證的實驗室，每年更是要麵臨各類盲樣考核，其中能力驗證是盲樣考核最重要且最主要的來源。
能力驗證是對實驗室的技術能力的證明，在一個評審周期內若能多次參加能力驗證，既可提升實驗室的檢測、技術能力，同時也是自身技術水平的彰顯。本文主要就微生物盲樣檢測過程中需要注意的事項進行詳細闡述。
二、物品準備
1、合理保存、及時檢測
與一般樣品檢測不同的是，微生物盲樣的檢測，具有很強的時效性。因為盲樣中的菌體是活菌體，隨著時間的延長，樣品中菌體的含量會有所下降，尤其對含定量菌的盲樣來說，拿到樣品進行第一時間檢測尤為重要。如果不能及時檢測，或者對檢測時間有特殊規定時，要將樣品進行合理保存，避免條件不當，造成樣品中菌數發生較大變化。
2、周密的準備工作
（1）操作人員：無論是否需要做盲樣考核，都要加強日常管理，按照實驗操作標準規範來做，熟悉方法原理和操作流程，如果平時嚴格按照操作規範來做，盲樣考核一定沒問題。
（2）試劑溶液的準備：需根據檢測指標的不同配備對應且充足的試劑溶液，並進行校準以保證實驗試劑的準確性。
（3）標準容器：即量具和存放溶液的容器，諸如各個規格的大肚移液管、刻度吸管、容量瓶、錐形瓶等等，都要在進行盲樣考核之前清洗幹淨，必要時可以泡酸處理。同時實驗用水、試劑等物質也要提前確定在有效期內且數量充足。
3、仔細閱讀作業指導書
對於盲樣考核來說，作業指導書就是方向標，會告訴你大量關鍵信息，尤其對微生物檢測來說，仔細研讀作業指導書，嚴格按照要求來做，顯得尤為重要。
三、操作要點
1、準確性：所用容器盡量與作業指導書中所述一致。在對凍幹菌株盲樣進行檢測時，雖然大多數步驟都是相似的，但仔細對比，還是有很多不同。比方說容器，樣品處理階段，有的實驗室喜歡用錐形瓶，有的喜歡用廣口瓶，還有的喜歡用均質袋，並且即使同種容器，規格不同，也會使檢驗結果差異較大（圖1）。
錐形瓶與廣口瓶：
均質袋：
圖1 試驗中常用的稀釋容器
2、有關振蕩混勻：通常樣品的混勻需要用到旋渦振蕩器或者拍打式均質器，但有些操作人員也會用手工進行晃動混勻。旋渦振蕩20s的效果，如果用手工拍打，需要80多下才能等同，但通常來講，人工拍打，一般不會拍打那麽多次，尤其對於一些無色液體（比如水樣）樣品，可能會簡單搖晃幾下就認為已經混勻。而實際上，樣品中的菌體並未被均勻分散開，這就造成吸取樣品液的時候，吸取的菌數不均勻，並進一步影響後續的稀釋過程，直接導致檢測結果的誤差。所以，在微生物盲樣檢測過程中，應盡量使用振蕩器進行混勻，而非手工搖勻。
3、有關泡沫：樣品經過振蕩混勻之後，通常上麵會產生大量泡沫（圖2）。此時，一定不能直接吸取樣液進行稀釋，而應該靜置一段時間，等泡沫消失之後再進行吸取、稀釋和計數。如果不這樣操作，就會導致大量菌體漂浮在上層泡沫中，造成檢測的結果菌數偏低。
圖2 旋渦振蕩器震蕩後樣品液體表麵的泡沫狀態
4、操作：有時候為了試驗需要，需要將少量的樣品進行轉移到較大的容器中，一定要保證所有的樣品盡量全部轉移。比如說，用1mL稀釋液溶化樣品後，如果隻吸取1mL進行轉移，就會漏掉很多菌體。正確的做法應該是多吸幾次，保證樣品盡量全部轉移。
5、培養條件：對於微生物計數的培養基的溫度控製，尤為重要。有的作業指導書中明確要求是46℃進行傾注，這個必須是經過恒溫水浴鍋水浴之後才能確定的，有的人通常隻憑經驗，用手摸著不燙就進行傾注，這樣也會導致結果的差異。對於有些菌種48℃的培養基傾注計出的菌數和46℃傾注培養出的數目是會有很大的差別的。
規範操作檢測結果：
不規範操作檢測結果：
圖3 同一瓶樣品規範操作和不規範操作的檢驗結果差異
綜上所述，微生物檢測過程的每個環節，都會造成結果不同程度的差異。而這些差異疊加起來，誤差就會越來越大，造成最終結果的偏離（圖3）。尤其當樣品中菌數本身就偏低的情況下，這種誤差更會逐級放大，最後甚至造成有菌也檢測不出來的情況。所以，提醒每一位參與盲樣檢測的人員，都應該嚴格試驗操作，格外注意試驗過程的細節。
注:本文屬betway必威西汉姆联生物原創,未經允許不得轉載。
上一篇：常用菌種的傳代與保存方法
