【原理】
豬肺消化液含有支原體生長所需的某些基本營養成分,可代替馬丁氏培養基中的豬胃和牛肉浸液;卵黃液與馬血清比較,膽固醇、脂蛋白、磷脂等支原體生長促進因子含量更高,而蛋白質含量甚低,以卵黃液作為支原體培作基的添加成分,具有成本低、取材容易、促進生長作用更等優點,而且用於抗原製備時還能減少由支體原吸附蛋白質產生的抗原的非特異性。
【成分】
豬肺消化液
800ml
卵黃液
100ml
100000u/ml青黴素G
5ml
酵母浸液
100ml
50%葡萄糖
20ml
0.4%酚紅
5ml
【製法】
(1)豬肺消化液的製備:鮮豬肺250g,絞碎後加入蒸餾水1000ml,濃鹽酸2ml,胃蛋白酶2g,56℃水浴15小時,沸水浴10分鍾終止消化,脫脂棉過濾,加蛋白10g, Tris 1g,調至pH7.8,沸水浴15分鍾,冷卻後濾紙過濾,121℃滅菌15分鍾,冷卻後備用;
(2)卵黃液的製備:新鮮雞蛋洗淨蛋殼,75%酒精浸泡15分鍾,無菌操作取出卵黃,加玻璃珠搖成勻漿,以pH7.8PBS配成20%(V/V)之懸液,8000rpm離心1小時,取上清液,加青黴素500u/ml,無菌試驗檢查後分裝備用;
(3)酵母浸液的製備:鮮酵母500g,加蒸餾水1500ml,充分攪拌,80~90℃水浴20分鍾,冷卻後,8000rpm離心20分鍾,取上清液以1mol/L氫氧化鈉調節至pH7.8,再以450nm濾膜除菌過濾,分裝備用;
(4)上述成分按比例混合,加入其餘無菌添加成分,最終pH7.8。
【用途】
分離各種人支原體及實驗室製備支原體抗原。
【注意事項】
1.豬肺須優質、新鮮,雞蛋須新鮮、無汙染。
2.豬肺消化液、卵黃液4℃保存,酵母浸液-20℃保存。
3.用於肺炎支原體培養時加葡萄糖,而其他人類支原體培養改加0.1%精氨酸。
(第二軍醫大學長征醫院 俞康龍供稿)
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