橋壩式選擇培養基

【原理】

  本培養基為一複合培養基。亞碲酸鉀胰蛋白䏡基礎瓊脂平皿中含0.05％的亞啼酸鉀以抑製革蘭氏陰性細菌的生長；硫氰酸鉀液體及半固體培養基中含有0.375％的硫氰酸鉀，有抑製革蘭陰性細菌及部分革蘭氏陽性細菌的作用。濾紙條橋與半固體壩可讓有動力的單核球增多性李斯特氏菌(Listerid monocytogenes)通過而阻止無動力的雜菌通過，因此本培養基具有高度選擇性。單核球增多性李斯特氏菌在本瓊脂平皿培養基上生長成黑色小菌落。

【成分】

  1.亞啼酸鉀胰蛋白䏡基礎瓊脂平皿培養基（每升蒸餾水中的成分）

胰蛋白䏡	15g
胰蛋白腖	5g
葡萄糖2g	2g
氯化鈉	5g
磷酸氫二鈉	2.5g
瓊脂粉（日本進口分裝）	15g
5%(W/V）亞碲酸鉀水溶液 （單獨滅菌或過濾除菌）	10mI

  2.硫氰酸鉀液體及半固體培養基（每升蒸餾水中的成分）

胰蛋白䏡（Oxoid)	15g
胰蛋白腖（Oxoid)	5g
硫氰酸鉀（最終濃度為0.375%)	3.75g
氯化鈉	5g
CT吐溫80	10ml
瓊脂粉（日本進口分裝）	0.35%(W/V)

【製法】

  1.亞啼酸鉀胰蛋白䏡基礎瓊脂平板：

  將上述成分（除亞啼酸鉀外）懸浮於1000ml蒸餾水內，加熱溶解，調整至pH7.2,121℃滅菌15分鍾，冷至50℃左右，加入無菌5％亞啼酸鉀水溶液10ml，混勻（最終濃度為0.05%）後，傾注平皿備用。

  2.硫氰酸鉀液體及半固體培養基：

  懸浮上述各成分（除瓊脂粉外)於1000蒸餾水內，加溫使完全溶解，調整至pH7.2.此即為硫氰酸鉀液體培養基。在100ml液體培養基中加入0.35g的瓊脂粉，加溫溶解後即為硫氰酸鉀半固體培養基。兩者均以高壓滅菌（121℃,15分鍾）取出後，半固體培養基置50℃水浴中備用或臨用前在水浴中加溫溶解。

  3.橋壩式選擇培養基：

  取製好的亞啼酸鉀瓊脂平皿培養基，在中間開一條寬為4~5mm的直溝，注意在兩端各留0.5cm距離的瓊脂不切去，這樣可保持中溝寬度的穩定。再在無菌操作下於中溝內滴加在50℃水浴保溫的硫氰酸鉀半固體培養基至滿，以等距離間隔並與中溝垂直放入預先幹熱滅菌的1X4(cm）濾紙條3張跨接於溝的兩端作為橋，再將滅菌鋁片框，即取寬度為6mm，長的200mm的鋁片條圍成一中空長立方形框架，其長為90mm（根據培養血的直徑而定），寬4mm，高6mm，接頭處扣，然後將框的上下兩麵在細油石平麵上磨平，洗淨，滅菌後備用，置於中溝之上並輕壓之。再在框內加入溶解的硫氰酸鉀半固體培養基使與框邊水平，待凝固後輕輕取出鋁片框，兩端與平皿相接處再加溶解的半固體培養基連接並加至壩的同樣高度，此壩把瓊脂平板培養基分隔成兩半，左邊 A 為病料懸液接種端，右邊 B 為分離端。

【用途】

  分離單核球增多性李斯特氏菌用。

【注意事項】

  在製備亞啼酸鉀瓊脂平板時，亞啼酸鉀不能直接加入培養基中一起滅菌，否則因高熱而使整個培養基變黑。采用亞啼酸鉀溶液單獨分開滅菌或過濾除菌後待培養基冷至50℃左右再加入到培養基中，可避免培養基變黑。

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