一、產氣莢膜梭菌簡介
產氣莢膜梭菌為厭氧芽孢菌,是引起食源性胃腸炎最常見的病原之一。可引起食物中毒爆發,常與公共飲食有關。例如:學校的自助食堂和養老院的護理病房,最常發生於兒童和老人,患者常劇烈腹絞痛和腹瀉,少數脫水死亡。
該菌的形態為:兩端鈍圓、直杆狀、革蘭氏陽性,卵圓形芽孢位於菌體中央或近端,不比菌體明顯膨大,在人和動物活體組織內或在含血清的培養基內生長時有可能形成莢膜,對其染色後顯微鏡下的形態如圖1。
圖1 產氣莢膜梭菌的顯微形態
產氣莢膜梭菌廣泛分布於環境中,引起人類感染的大多是畜禽肉類和魚類,牛奶也可因汙染而引起中毒,其原因是食品加熱不徹底,使芽孢大量繁殖所致。
該菌屬於厭氧性細菌,但對厭氧程度的要求並不太嚴,甚至在低氧的環境內也能生長。在普通培養基上能生長,若添加葡萄糖、血液,則生長更好。
在食品檢驗和飲用天然礦泉水檢驗中,都有相應的標準要求對樣品中產氣莢膜梭菌的數量進行檢驗。怎樣從樣品中將產氣莢膜梭菌有效地分離出來,是進行檢驗和鑒定的先決條件。本文主要介紹與產氣莢膜梭菌分離有關的2種培養基,對配方和使用方法方麵進行對比描述。
二、培養基對比介紹
能夠對產氣莢膜梭菌進行分離的培養基主要有2種,分別為胰䏡-亞硫酸鹽-環絲氨酸瓊脂(TSC)和亞硫酸鹽-多粘菌素-磺胺嘧啶瓊脂(SPS),這兩種培養基的異同及產氣莢膜梭菌在這兩種培養基上的菌落形態如表1、圖2。
表1 兩種產氣莢膜梭菌培養基的異同
比較項目 |
培養基名稱 |
|
TSC |
SPS |
|
配方成分 |
胰腖、大豆腖、酵母粉、 焦亞硫酸鈉、檸檬酸銨、瓊脂 |
胰酪蛋白腖、酵母浸粉、 檸檬酸鐵銨、亞硫酸鈉、瓊脂 |
添加劑 |
D-環絲氨酸溶液 |
多粘菌素B和磺胺嘧啶鈉 |
pH值 |
7.6±0.2 |
7.0±0.1 |
相關標準 |
GB 4789.13-2012 食品微生物學檢驗 產氣莢膜梭菌檢驗 |
GB 8538-2016 飲用天然礦泉水檢驗方法 產氣莢膜梭菌檢驗 |
使用方法 |
平皿傾注法 |
濾膜法 |
菌落特征 |
黑色菌落 |
|
|
TSC瓊脂 |
SPS瓊脂 |
圖2 產氣莢膜梭菌在兩種培養基上的菌落形態
三、注意事項
(1)使用不同的標準檢驗不同的樣品,需要選用的培養基不同,要根據實際目的選用合適的分離培養基;
(2)雖然這兩款培養基基本配方很相近,但它們的pH和所配套使用的添加劑是不一樣的,使用時要注意區別,不要混用;
(3)兩種培養基的使用方法不一樣,使用時要選用與培養基要求一致的分離方法;
(4)因為這兩款培養基都是用於分離產氣莢膜梭菌,為了有效地將目標菌分離出來,一定不要忘記采用厭氧培養的方式進行培養。可以配套使用betway必威西汉姆联公司生產的厭氧產氣包和厭氧培養袋。
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