一、克羅諾杆菌屬情況簡要介紹
克羅諾杆菌屬（Cronobacter）屬於腸杆菌科，革蘭氏陰性杆狀菌，（0.6～1.0）μm×（1.2～3.0）μm。不形成芽孢，無莢膜，形成周生鞭毛。需氧或兼性厭氧，最適溫度為30℃～37℃。37℃培養18h～24h菌落圓形、微凸、光滑濕潤、黃色、邊緣整齊，直徑為2mm～3mm。
克羅諾杆菌屬廣泛分布於自然界中，在食品、飲料、加工原料、生產環境等都能分離到該菌。克羅諾杆菌屬與散發的或小規模暴發的敗血症、腦膜炎、大腦炎、壞死性小腸結腸炎相關。大多數感染被發現於低體重新生兒（如低於2kg）或者早產兒（即妊娠少於37周）。報道死亡率高達50%，但近年來已經降低到20%。克羅諾杆菌的傳染源目前還不清楚。但在生產奶粉和其他食品的工廠或家庭中被頻繁地檢測到。商業生產的未消毒嬰兒配方奶粉常被作為該菌暴發時的感染源。雖然嬰兒配方奶粉以外的傳染源尚未被發現，但是在環境中的傳染源可能還是存在的。
二、參考標準
《GB 4789.40-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 克羅諾杆菌屬（阪崎腸杆菌）檢驗》點擊下載
三、檢驗方法以及結果分析
第一法克羅諾杆菌屬定性檢驗
3.1檢驗程序
克羅諾杆菌屬檢驗程序見圖1。
圖1 克羅諾杆菌屬檢驗程序
3.2操作步驟
3.2.1 前增菌和增菌
取檢樣100g（mL）置滅菌錐形瓶中，加入900mL已預熱至44℃的緩衝蛋白腖水，用手緩緩地搖動至充分溶解，36℃±1℃培養18h±2h。移取1mL轉種於10mL mLST-Vm（改良月桂基硫酸鹽胰蛋白腖肉湯-萬古黴素）肉湯，44℃±0.5℃培養24h±2h。
質控菌株接種到mLST-Vm肉湯中，培養結果如下圖所示：
圖2 不同細菌在mLST-Vm肉湯上的生長情況
3.2.2 分離
輕輕混勻mLST-Vm肉湯培養物，各取增菌培養物1環，分別劃線接種於兩個阪崎腸杆菌顯色培養基平板，顯色培養基須符合GB4789.28的要求，36℃±1℃培養24 h±2 h，或按培養基要求條件培養。
阪崎腸杆菌劃線接種到betway必威西汉姆联阪崎腸杆菌顯色培養基平板，培養結果如下圖所示：
|
阪崎腸杆菌ATCC 29544 阪崎腸杆菌CICC 10318 |
圖3 阪崎腸杆菌在阪崎腸杆菌顯色培養基平板上的菌落特征
挑取至少5個可疑菌落，不足5個時挑取全部可疑菌落，劃線接種於TSA平板。25℃±1℃培養48h±4h。
阪崎腸杆菌接種到TSA平板，有黃色素產生，培養結果如下圖所示：
圖4 阪崎腸杆菌在TSA平板上的菌落特征
3.2.3 鑒定
自TSA平板上直接挑取黃色可疑菌落，進行生化鑒定。可選擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定係統。
阪崎腸杆菌氧化酶為陰性，2min內不變色，結果如下圖所示：
圖4 阪崎腸杆菌氧化酶試驗結果
阪崎腸杆菌接種至HBI阪崎腸杆菌生化鑒定條（GB），結果如下圖所示：
圖5 阪崎腸杆菌在HBI阪崎腸杆菌生化鑒定條（GB）上的結果
克羅諾杆菌屬的主要生化特征見下表。
表1 克羅諾杆菌屬的主要生化特征
|
生化試驗 |
特征 |
|
|
黃色素產生 |
+ |
|
|
氧化酶 |
- |
|
|
L-賴氨酸脫羧酶 |
- |
|
|
L-鳥氨酸脫羧酶 |
（+） |
|
|
L-精氨酸雙水解酶 |
+ |
|
|
檸檬酸水解 |
（+） |
|
|
發酵 |
D-山梨醇 |
（-） |
|
L-鼠李糖 |
+ |
|
|
D-蔗糖 |
+ |
|
|
D-蜜二糖 |
+ |
|
|
苦杏仁甙 |
+ |
|
|
注：+>99%陽性；->99%陰性； （+）90%~99%陽性；（-）90%~99%陰性。 |
||
3.3結果與報告
綜合菌落形態和生化特征，報告每100 g（mL）樣品中檢出或未檢出克羅諾杆菌屬。
第二法克羅諾杆菌屬的計數
3.4操作步驟
3.4.1 樣品的稀釋
固體和半固體樣品：無菌稱取樣品100g、10g、1g各三份，分別加入900mL、90mL、9mL已預熱至44℃的BPW，輕輕振搖使充分溶解，製成1:10樣品勻液，置36℃±1℃培養18h±2h。分別移取1mL轉種於10mL mLST-Vm肉湯，44℃±0.5℃培養24h±2h。
液體樣品：以無菌吸管分別取樣品100mL、10mL、1mL各三份，分別加入900mL、90mL、9mL已預熱至44℃的BPW，輕輕振搖使充分混勻，製成1:10樣品勻液，置36℃±1℃培養18h±2h。分別移取1mL轉種於10mL mLST-Vm肉湯，44℃±0.5℃培養24h±2h。
3.4.2 分離、鑒定
同3.2.2和3.2.3。
3.5結果與報告
綜合菌落形態、生化特征，根據證實為克羅諾杆菌屬的陽性管數，查MPN檢索表，報告每100g（mL）樣品中克羅諾杆菌屬的MPN值（見下表）。
表2 克羅諾杆菌屬最可能數（MPN）檢索表
相關標準：
GB 4789.40-2016 克羅諾杆菌屬（阪崎腸杆菌）檢驗 點擊下載
注:本文屬betway必威西汉姆联生物原創,未經允許不得轉載。
