【原理】
軍團菌(Legionella)的分離培養需滿足它對多種營養物質的需要以及嚴格的pH條件。對軍團菌的生理研究表明,為保證該菌的正常生長和繁殖需要有20種氨基酸,半胱氨酸是重要氨基酸之一。B族維生素及鐵是不可缺的成分,α酮戊二酸有刺激生長的作用。
本改進培養基的基礎營養為酵母提取物及半胱氨酸,以複合維生素B及右旋糖酐鐵滿足對生長因子及鐵元素的需要,添加α酮戊二酸為生長刺激劑。用過濾法除菌防止產生毒性物質,並有效保持pH值的準確,因而該菌在此培養基中生長繁殖快。
【成分】
甲液:
酵母提取物
2.00g
L 半胱氨酸
0.08g
α酮戊二酸
0.20g
右旋糖酐鐵
0.80g
複合維生素B溶液
2.00ml
蒸餾水
1000ml
pH
6.9±0.05
瓊脂
3.0g
蒸餾水
1000ml
【製法】
(1)甲液全部成分按量溶於水中,用KOH溶液調整至pH6.9±0.05, pH測定應使用靈敏度不低於0.05的器材因軍團菌對Na+敏感,配製時最好用去離子水;
(2)配製後先用濾紙去一般不溶物,再用G6濾器除菌(如過濾困難亦可先經G5過濾)。除菌濾液按需定量分裝,冰箱保存備用;
(3)乙液用去離子水(pH應接近中性)配製,瓊脂含量可視情選定,121℃滅菌15分鍾備用。乙液的分裝量應與甲液對等、但容器需有2倍容積;
(4)使用時將乙液融化,同時將甲液保溫到55~60℃,待乙液降溫到55℃左右時,與甲液等量混合傾注平皿,製成平板分離培養基。
【用途】
主要用於軍團菌的增殖和分離培養。
【注意事項】
α-YE使用效果良好,材料易得,無需加緩衝劑可保pH準確。因不含活性碳便於觀察產生褐色素反應及作氧化酶試驗。甲液成分半量配製可作液凍培基用於增菌培養。α-YE加入抗生素亦可製成選擇性培基。
(天津醫學院微生物學教研室 陳恩臨供稿 全章由第二軍醫大學 謝正暘審編)
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