沙門氏菌檢驗用增菌培養基的選擇與應用

 一、沙門氏菌簡介：

  《Bergey’s鑒定細菌學手冊》第9版（1994）對沙門氏菌的描述為：沙門菌為G-直杆菌，大小(0.7-1.5)μm×(2.0-5.0)μm，菌落直徑2mm-4mm。通常具有周鞭毛，能運動，兼性厭氧，最適培養溫度37℃，發酵D-葡萄糖及其他糖類產酸，通常產氣，氧化酶陰性，觸酶陽性，靛基質和V-P試驗陰性，甲基紅（MR）試驗及西蒙枸櫞酸鹽陽性，賴氨酸和鳥氨脫羧陽性，精氨酸雙水解酶反應不定。產生H₂S，不水解尿素，氰化鉀培養基生長和利用丙二酸鹽不定，能還原硝酸鹽，通常發酵L-阿拉伯糖、麥芽糖、D-甘露醇、D-甘露糖、L-鼠犁糖、D-山犁糖和D-木糖。

  沙門氏菌屬食物中毒是一種常見的細菌性食物中毒，原因主要是食品被沙門氏菌汙染、繁殖，再加上處理不當，未能殺死沙門氏菌。在加工被汙染的豬肉及內髒時，常因加熱不夠或切塊太大，食品中心部分仍有存活的細菌，食後可致中毒。另外，在患病的牛乳中，如加熱不徹底也可中毒。

  沙門氏菌食物中毒主要有三種表現類型，即胃腸型、傷寒型、敗血症型。以胃腸型最為常見。前期症狀有寒戰、頭痛、頭暈、惡心與痙攣性腹痛，繼之出現嘔吐、腹瀉、全身酸痛或發熱，每天腹瀉可達7～8次，體溫在38℃～40℃之間，病程約3～5天，一般2～3天腹瀉停止，體溫恢複正常，一般情況好轉。嚴重者，特別是兒童，老年人和體弱者常因脫水、酸中毒、無尿、心力衰竭等，會因急救不及時而危及生命。

  鑒於以上所述的沙門氏菌的危害性，所以在食品檢驗中，需非常重視沙門氏菌的檢驗。能否用最有效的方法，對樣品中的沙門氏進行檢出，尤其重要。但由於沙門氏菌種類繁多，按照考夫曼·懷特的分類，已確認的沙門氏菌屬有2000多個血清型，根據沙門氏菌抗原結構的不同，可分為A、B、C、D、E等34個組，其中主要有豬霍亂沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、腸類沙門氏菌、雞沙門氏菌、鴨沙門氏菌等10多個血清型。

  如此龐雜的沙門氏菌家族，隻用一種培養基進行增菌，很難將樣品中所含的所有沙門氏菌一個不差地培養出來，所以很多標準規定采用兩種培養基進行增菌。

二、標準要求的培養基：

  《GB4789.4 食品安全國家標準  食品微生物學檢驗  沙門氏菌檢驗》中規定對沙門氏菌的增菌采用四硫磺酸鹽煌綠增菌液（TTB）和亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）培養基。其檢驗流程如圖1：

圖1  沙門氏菌檢驗程序

三、培養基比較：

  兩種培養基的比較如表1

表1 四硫磺酸鹽煌綠增菌液（TTB）和亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）培養基的比較

  從表中可以明顯看出，兩種培養基除了一些基本的營養成分外，最大的區別就是抑菌劑的選擇不同。TTB中選用了膽鹽、硫代硫酸鈉、四硫磺酸鈉（四硫磺酸鈉是在培養基加入碘液時形成）和煌綠作為抑菌劑，抑菌能力較強；而SC則選用了較單一的亞硒酸氫鈉作為抑菌劑。

  兩者的差別還在於以下幾點，使用時需要特別注意：

  1、抑菌劑的添加方式不同，TTB中膽鹽和硫代硫酸鈉直接添加到幹粉中，可進行高壓滅菌，但碘液和煌綠則是配成溶液的形式，需要將基礎滅菌後，使用前臨時加入培養基中，不宜久置；而SC中的亞硒酸氫鈉是直接加到幹粉中去的，可以與其它成分一起進行滅菌。

  2、兩種培養基滅菌方式不同，TTB基礎可高壓滅菌，SC隻能輕微煮沸（即剛開始沸騰就撤離加熱源）的方式，且要迅速用涼水冷卻，以免顏色發生變化，影響使用效果。

  3、兩種培養基的培養溫度不同，TTB需要在42℃±1℃條件下進行培養，而SC需要在36℃±1℃條件培養。

  4、不同種類的沙門氏菌在這兩種培養基中的生長情況如圖2

圖2  不同類型的沙門氏菌在TTB和SC培養基中的生長情況

四、討論：

  經常有人問，為什麽一定要用兩種培養基進行增菌，這兩種培養基增菌後的液體怎麽劃線，有沒有什麽選擇取舍之類的做法？答案是否定的。首先，我們之所以選擇兩種培養基進行增菌，其目的就是為了將樣品中的沙門氏菌盡量多地培養出來，關於接菌，標準（《GB4789.4 食品安全國家標準  食品微生物學檢驗  沙門氏菌檢驗》）中有明確描述：“輕輕搖動培養過的樣品混合物，移取1mL，轉種於10mLTTB內，於42℃±1℃培養18 h~24h。同時，另取1mL轉種於10mLSC內，於36℃±1℃培養18h~24h。”在這一過程中，兩種培養基本來就是互相補充，既然已經培養出來，肯定是要都進行劃線分離檢驗的。

  也就是說，TTB增菌液分別在標準中列出的BS和XLD上劃線，SC增菌液也要分別在BS和XLD上劃線， 最後兩種增菌液中劃線檢出的可疑菌株都要進行下一步檢驗。

  同樣的情況還有，有的標準中要求使用RV肉湯和SC培養基進行增菌，也要遵循這種做法，不能隻選用一種增菌液進行劃線。

相關產品：

亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）-點擊查看產品詳情

四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(TTB)-產品詳情

四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(TTB)-點擊查看產品詳情

相關標準：

GB 4789.4-2016 沙門氏菌檢驗 點擊下載

注:本文屬betway必威西汉姆联生物原創,未經允許不得轉載。

上一篇：生化反應中的符號說明

下一篇：最低抑菌濃度（MIC）測定-MH肉湯稀釋法