一、糞大腸菌群情況簡要介紹
糞大腸菌群，又稱耐熱大腸菌群（thermotolerant coliforms），44.5℃培養24h，能在MFC選擇性培養基上生長，發酵乳糖產酸，並形成藍色或藍綠色菌落的腸杆菌科細菌。
該菌群來自人和溫血動物糞便，作為糞便汙染指標評價食品的衛生狀況，推斷食品中腸道致病菌汙染的可能性。
二、參考標準
《HJ347.1-2018水質糞大腸菌群的測定濾膜法》點擊下載
三、檢驗原理
樣品通過孔徑為0.45μm的濾膜過濾，細菌被截留在濾膜上，然後將濾膜置於MFC選擇性培養基上，在特定的溫度（44.5℃）下培養24h，膽鹽三號可抑製革蘭氏陽性菌的生長，糞大腸菌群能生長並發酵乳糖產酸使指示劑變色，通過顏色判斷是否產酸，並通過呈藍色或藍綠色菌落計數，測定樣品中糞大腸菌群濃度。
四、檢驗方法以及結果分析
4.1 樣品
4.1.1 樣品采集
點位布設及采樣頻次按照GB/T14581、HJ/T494和HJ/T91的相關規定執行。采集微生物樣品時，采樣瓶不得用樣品洗滌，采集樣品於滅菌的采樣瓶中。樣品采集量可根據水體實際情況而定，一般不少於250mL。
采集河流、湖庫等地表水樣品時，可握住瓶子下部直接將帶塞采樣瓶插入水中，約距水麵10cm～15cm處，瓶口朝水流方向，拔瓶塞，使樣品灌入瓶內然後蓋上瓶塞，將采樣瓶從水中取出。如果沒有水流，可握住瓶子水平往前推。采樣量一般為采樣瓶容量的80%左右。樣品采集完畢後，迅速紮上無菌包裝紙。
從龍頭裝置采集樣品時，不要選用漏水龍頭，采水前將龍頭打開至最大，放水3min～5min，然後將龍頭關閉，用火焰灼燒約3min滅菌或用70%～75%的酒精對龍頭進行消毒，開足龍頭，再放水1min，以充分除去水管中的滯留雜質。采樣時控製水流速度，小心接入瓶內。
采集地表水、廢水樣品及一定深度的樣品時，也可使用滅菌過的專用采樣裝置采樣。在同一采樣點進行分層采樣時，應自上而下進行，以免不同層次的攪擾。
如果采集的是含有活性氯樣品，需在采樣瓶滅菌前加入硫代硫酸鈉溶液，以除去活性氯對細菌的抑製作用（每125mL容積加入0.1mL的硫代硫酸鈉溶液）；如果采集的是重金屬離子含量較高的樣品，則在采樣瓶滅菌前加入乙二胺四乙酸二鈉溶液，以消除幹擾（每125mL容積加入0.3mL的乙二胺四乙酸二鈉溶液）。
注：15.7mg硫代硫酸鈉可去除樣品中1.5mg活性氯，硫代硫酸鈉用量可根據樣品實際活性氯量調整。
4.1.2 樣品保存
采樣後應在2h內檢測，否則，應10℃以下冷藏但不得超過6h。實驗室接樣後，不能立即開展檢測的，將樣品在4℃以下冷藏並在2 h內檢測。
4.2 分析步驟
4.2.1 樣品過濾
根據樣品的種類判斷接種量，最小過濾體積為10mL，如接種量小於10mL時應逐級稀釋。
先估計出適合在濾膜上計數所使用的體積，然後再取這個體積的1/10和10倍，分別過濾。理想的樣品接種量是濾膜上生長的糞大腸菌群菌落數為20個～60個，總菌落數不得超過200個。當最小過濾體積為10mL，濾膜上菌落密度仍過大時，則應對樣品進行稀釋。1:10稀釋的方法為：吸取10mL樣品，注入盛有90mL無菌水的三角燒瓶中，混勻，製成1:10稀釋樣品。樣品接種量參考表見表1。
表1 接種量參考表
用滅菌鑷子以無菌操作夾取無菌濾膜貼放在已滅菌的過濾裝置上，固定好過濾裝置，將樣品充分混勻後抽濾，以無菌水衝洗器壁2次～3次。樣品過濾完成後，再抽氣約5s，關上開關。
4.2.2 培養
用滅菌鑷子夾取濾膜移放在MFC培養基上，濾膜截留細菌麵向上，濾膜應與培養基完全貼緊，兩者間不得留有氣泡，然後將培養皿倒置，放入恒溫培養箱內，44.5℃±0.5℃培養24h±2h。
MFC培養基檢驗原理：胰腖、多腖和酵母膏粉提供氮源、維生素和生長因子；氯化鈉維持均衡的滲透壓；乳糖為可發酵糖類；三號膽鹽抑製革蘭氏陽性菌；瓊脂是培養基的凝固劑；玫紅酸和苯胺藍為pH指示劑。糞大腸菌群可在44.5℃條件下分解乳糖產酸，使培養基pH下降，菌落為亮藍色，其他不發酵乳糖的腸道菌菌落為無色、灰色或淡紅色。
用法：稱取本品52.3克，加熱煮沸溶解於1000mL蒸餾水中，冷卻至45℃-50℃時，傾入無菌平皿。無需高壓滅菌。
圖1 不同細菌在MFC瓊脂上的生長特征
4.2.3 對照試驗
（1）空白對照
每次試驗都要用無菌水按照步驟4.2.1和4.2.2進行實驗室空白測定。
（2）陽性及陰性對照
將糞大腸菌群的陽性菌株（如大腸埃希氏菌Escherichia coli）和陰性菌株（如產氣腸杆菌Enterobacter aerogenes）製成濃度為40～600CFU/L的菌懸液，分別按照4.2.1～4.2.2步驟培養，陽性菌株應呈現陽性反應，陰性菌株應呈現陰性反應，否則，該次樣品測定結果無效，應查明原因後重新測定。
五、結果計算與表示
5.1 結果判讀
MFC培養基上呈藍色或藍綠色的菌落為糞大腸菌群菌落，予以計數。MFC培養基上呈灰色、淡黃色或無色的菌落為非糞大腸菌群菌落，不予計數。
5.2 結果計算
樣品中的糞大腸菌群數（CFU/L），按照下列公式進行計算：
式中：C——樣品中糞大腸菌群數，CFU/L；
C1——濾膜上生長的糞大腸菌群菌落總數，個；
1000——將過濾體積的單位由mL轉換為L；
f——樣品接種量，mL；
注：若平行樣結果都在20～60CFU/L範圍內，最終結果取平均值以幾何平均計算。
5.3 結果表示
測定結果保留至整數位，最多保留兩位有效數字，當測定結果≥100 CFU/L時，以科學計數法表示。
六、注意事項：
6.1 活性氯具有氧化性，能破壞微生物細胞內的酶活性，導致細胞死亡，可在樣品采集時加硫代硫酸鈉溶液消除幹擾。
6.2 重金屬離子具有細胞毒性，能破壞微生物細胞內的酶活性，導致細胞死亡，可在樣品采集時加入乙二胺四乙酸二鈉溶液消除幹擾。
相關產品：
相關標準：
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