【原理】
梅毒感染後，一般經過2~4周的潛伏期在侵入部位出現第1個臨床症狀-硬下疳，此時體內多已產生可以檢出的特異抗體，首先是IgM型，同時伴有IgG型，隨著病程的進展，IgG型抗體逐漸升高，至第2期達頂點，以後稍有下降，但一直保持。而且，隻要感染過程存在，體內即有 IgM抗體產生，當治療後感染過程終止，IgM型抗體即消失。因此，檢測病人特異IgG型和IgM型抗體，可以確定是否梅毒感染，而在梅毒治療過程中，IgM型抗體從陽性轉為陰性，則是梅毒治愈的標誌，但治療後IgG型抗體可終身保持，並能被FTA-ABS法檢出。FTA-ABS試驗，是國際上公認的檢出梅毒特異抗體的首選方法，其敏感性和特異性均高於其它方法。如對一期梅毒、晚期潛伏和三期複發梅毒的檢出敏感性均高於VDRL法。本法以完整的梅毒密螺旋體（Nichols標準毒株）作為抗原，塗於載玻片上，然後加病人血清與之反應，如血清中有特異抗梅毒螺旋體抗體，則必與玻片上的梅毒螺旋體結合，再加上抗人免疫球蛋白熒光抗體，梅毒螺旋體就會被此熒光抗體包被，於熒光顯微鏡下即可見發特異熒光的形態典型的梅毒螺旋體。
由於人體內（如口腔、陰道）棲居有其它密螺旋體，它們有時也可引起局部感染，使體內產生相應的抗體，其中部分與梅毒螺旋體有交叉反應。因此，當血清稀釋度不高時（如1:5~1:50)，常可使梅毒熒光抗體試驗（FTA）出現一定比例的假陽性，而當血清稀釋至1:100~1:200時，又可將部分真的梅毒感染漏檢。於是，自1969年開始，采用無毒密螺旋體Re-iter株培養液吸收血清中群交叉抗體，使血清在1:5稀釋時不會產生交叉反應，從而既提高了方法的特異性，又不降低敏感性。此法即FTA -ABS (Fluorescent Treponemal antibody-absorption)。經過國際上約20年的廣泛應用，證明它是血清學方法中一種最成功的方法。僅在美國，每年用此法檢驗的血清標本數達數千萬份之多。根據美國疾病控製中心（CDC）的研究，FTA-ABS的敏感性對一期梅毒為98%，二期為100%，潛伏期為100%，三期（晚期）為96%，對各期的特異性則達98%(95%~99%)。
【成分及製法】
1.FTA抗原：為從感染梅毒螺旋體標準毒株(Nichols)的家兔睾丸中提取的純螺旋體，或直接塗於特製載玻片上（此載玻片為10眼、6眼、4眼等型號），經丙酮固定後保存備用；其螺旋體密度為高倍視野20~30條，並襯有羊紅血球作背景，或凍於瓶中，低溫保存。由使用者自己塗製抗原片方法如下：將幹燥抗原加滅菌蒸餾水1ml，振蕩至完全溶解，以吸管吸打8~10次，使螺旋體凝團均勻分散，然後塗製抗原基片；用特製或自己用鑽石筆刻劃的限圈載玻片，每圈塗1白金耳抗原，室溫幹燥15分鍾以上，隨即浸入優級丙酮中10分鍾以固定螺旋體（每200ml丙酮固定的玻片不應多於50張）；水溶後此抗原應當全部塗製玻片固定後幹燥保存於低溫下備用（可置於小幹燥器中或密封於塑料袋內置冰箱）。
2.FTA陽性對照血清：為標準化的凍幹的已經1:5稀釋的梅毒病人FTA- ABS陽性血清，在試劑盒啟用初期可與待測的血清同時染色，其螺旋體的熒光亮度應達“++”以上（即螺旋體形態清晰，黃綠色熒光明顯）。凍幹血清根據瓶簽說明稀釋。
3.FTA吸收劑：為特製的用以抑製非特異交叉反應的非致病性密螺旋體培養浸液，以0.2ml加待測熱滅活血清0.05ml，成1:5稀釋。
4.羊抗人或兔抗人IgG和／或IgM熒光抗體：為FITC標記的球蛋白，凍幹製品0.5ml包裝。用時以雙蒸水重溶，然後小量（0.2ml）分裝凍存備用。抗人IgGFA可用於各期梅毒的檢測，指示抗梅毒螺旋體IgG抗體的存在，抗人IgMFA 可用於早期及未治療的活動性梅毒的檢測，抗梅毒螺旋體IgM抗體的存在，表明體內有梅毒螺旋體活動。
熒光抗體水化後，取0.1ml按瓶簽指示稀釋，對陽性血清染色，用自己的熒光顯微鏡觀察熒光強度，如強度不足，可降低稀釋度，如強度很高，則可加大稀釋度。用時設FA直接染抗原的陰性對照。
5.吐溫80：用以製備熒光抗體稀釋液。將吐溫與9.8ml磷酸鹽緩衝液分別於水浴加溫至56℃，然後吸0.2ml吐溫至緩衝液中，充分衝洗吸管，混勻，pH應為7.0~7.2，置冰箱中可長期保存，如pH改變或產生沉澱則棄之。
6.封片劑：為純甘油與pH8.6緩衝鹽水按9:1混合而成。熒光抗體染色完成後，用毛細管吸取滴加在抗原塗區，量不必過多，以能擴散至蓋片全區又不使蓋片漂動為宜。此封片劑也可用作鏡油。
7.磷酸鹽緩衝液（PBS)：將30g幹粉溶於2670ml蒸餾水中，加入1.5ml預熱的吐溫80用作試驗血清的稀釋和染色玻片的浸泡。
8.FTA吸收劑對照：為與梅毒螺旋體有交叉反應的非梅毒病人血清，以PBS1:5稀釋，可使螺旋體染成陽性，而用吸收劑稀釋，則為陰性，本對照可證明吸收劑的可靠性。
【用途】
(1)檢出各期（從早期到晚期）梅毒病人體液（血、腦脊液等）中的抗梅毒螺旋體的特異IgG和IgM抗體，用以確定梅毒感染診斷和監測療效。
(2)供血者檢查。
(3)各種健康査體和婚前檢査。
【注意事項】
1.本試驗的標本為病人或被檢查者的血清。試驗前血清須56℃滅活30分鍾，已滅活過的血清也須於試驗當天再滅活10分鍾。
2.試驗程序：
(1)抗原片質量檢查：利用試劑盒提供的瓶裝幹燥抗原自已塗製的抗原片，染色前應用暗視野顯微術觀察一下螺旋體的密度和分布情況，如密度太低或螺旋體成團塊者，應重新用吸管或注射器反複抽吸，使螺旋體充分散開，塗製的抗原每高倍視野應不少於10條。
如直接用試劑盒提供的抗原片，則不須檢查，可直接進行染色，但從冰凍中取出的抗原片，必須徹底幹燥。並緩慢通過酒精燈火焰2次（以不燙手為度）。
(2)將已滅活的待測血清以吸收劑1:5稀釋（0.05ml血清加0.2ml吸收劑），充分混合後於37℃下放置20分鍾，使非特異性交叉反應抗體被充分吸收，即取20~30μl加於抗原塗膜上，使塗膜完全覆蓋。
陽性和陰性對照血清均分別以PBS和吸收劑同上作1:5稀釋處理，然後加於抗原膜上。
熒光抗體對照則於抗原膜上加PBS或吸收劑。
(3)將以上塗片置於濕盒內，密蓋，於35~37℃下孵育30分鍾。
(4)置塗片於玻片架上，以流動PBS衝洗去除已經反應的血清或對照液，然後浸於PBS中5分鍾，提拉10次，再換水重複浸洗1次。
(5)以蒸餾水衝洗5秒鍾，吸幹。
(6)以2％吐溫緩衝液稀釋抗人熒光抗體至工作濃度，每塗膜加10~20μl覆蓋。
(7)重複3、4步驟。
(8)以封片劑封片，防止壓入氣泡。
(9)熒光顯微鏡檢查，宜盡早完成，不能及時鏡檢的塗片須放置於冰盒內。
(10)如結果全為陰性，應以暗視野顯微術或普通顯微術檢查一下是否有螺旋體存在。
3.報告結果：鏡檢熒光抗體染色的熒光發射強度，是一個相對值，與熒光顯微鏡的光學係統密切相關，熒光強度的比較，隻能在同一裝置內進行才有意義，因此，相對熒光強度的判定應以所用熒光顯微鏡對已知陽性標本的染色情況來加以標化，觀察結果一般分3種：
(1)陽性：螺旋體的熒光強度在1+～4+之間，1+指熒光足以使螺旋形態典型，邊界清晰可見。2+以上的熒光強度則有很強的隨意性，其差別並無本質上的意義。
(2)邊界：熒光強度＜1+，即弱但肯定。
(3)陰性：可見背景發紅色熒光的血球但見不到螺旋體，或僅有模糊影像。1＋和＜1+的標本宜重試1次（陰性標本不必重試），如重試時為1+或更強，則報告為：“ FTA-ABS陽性”；如不足1＋則報告為：“FTA-ABS陰性”。
如有必要，強陽性標本可做稀釋度測定。熒光抗體可用抗人IgG或抗人IgM，根據診斷要求而定。
（軍事醫學科學院微生物流行病研究所黃策編 第二軍醫大學 謝正暘審）
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