抗兔免疫球蛋白熒光抗體

【原理】

  家兔是最常用的製備各種病原微生物(細菌、病毒、立克次體、螺旋體、支原體、衣原體、真菌等)抗血清的實驗動物,以某種微生物體或其抗原成分作為免疫原免疫家兔即可得到該種微生物的抗血清,從這種抗血清中提取免疫球蛋白即為抗該種微生物的抗體製劑。原則上,每種微生物都可從家兔免疫製得各自的抗體製劑.所有這些抗體製劑,除免疫球蛋白的可變區—抗原結合位點不同外,其餘部分的分子結構都是相同的,因而具有共同的抗原性,因此都可以和抗兔(通常以山羊或綿羊製備,簡稱羊抗兔,如以馬製備,則稱馬抗兔)熒光抗體結合,從而間接顯示某種抗微生物抗體與對應微生物體或其抗原的結合。這裏,兔抗微生物抗體稱為第1抗體,而熒光標記的抗兔免疫球蛋白抗體則稱為第2抗體。

【製法】

  (1)提取正常健康雄性成年家兔免疫球蛋白(IgG)作免疫原;

  (2)以上述家兔免疫球蛋白免疫羊或其它適宜動物,製取抗兔免疫球蛋白G的抗血清;

  (3)從以上抗血清中提取IgG;

  (4)以熒光素標記提取的IgG,並純化簽定,確定染色效價的工作濃度。

【用途】

  主要用作熒光抗體間接染色法以檢測未知抗原,用以作傳染病的快速診斷或菌毒種的血清學鑒定。在家兔免疫過程中,也可用已知免疫原(如微生物體或病毒感染細胞)作底物檢測抗體效價或滴度消長變化。

【注意事項】

  1.以間接染色法檢測微生物體或其抗原成分時,第1抗體的稀釋度必須適當,太濃易發生抗體密度過大,產生空間位障,使第2抗體反而不易結合;過稀則不能結合足夠量的第2抗體。這兩種情況都會使熒光強度減弱,並降低敏感性。

  2.標記抗體的F/P克分子比不得超過2,否則易產生非特異染色,使結果判斷的準確性降低。

  3.為了準確確定第1抗體的合適稀釋度,最好用標準抗原作“方陣法”染色滴定。

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