李氏菌增菌肉湯（LB1,LB2）基礎原理及使用方法

一、用途：

  添加萘啶酮酸，吖啶黃素即為LB1，LB2，用於李斯特氏菌二步增菌(GB4789.28-2013，GB 4789.30-2016)。

二、實驗原理：

  胰腖、多價腖和酵母膏提供氮源、維生素和生長因子；李斯特氏菌可耐受較高含量的氯化鈉；磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉為緩衝劑；七葉苷為可發酵的糖類；萘啶酮酸和吖啶黃為選擇性抑菌劑，抑製非李斯特氏菌的生長。

三、培養基配方（g/L）：

此配方可以進行改良或增加營養成分以獲得最佳的結果

四、試驗方法：

  1、稱取本品49.4g， 加熱攪拌溶解於 1000ml蒸餾水中，分裝， 121℃高壓滅菌15分鍾，備用。

    LB1液：每225ml培養基中加入1支萘啶酮酸（5.0mg/支）和1支吖啶黃素（3.0mg/支）；

    LB2液：每200ml培養基中加入1支萘啶酮酸（4.0mg/支）和1支吖啶黃素（5.0mg/支）。

  2、製備質控菌液。

  3、混合菌的接種

  在裝有待測培養基的試管中接種10-100CFU的目標菌，並接種1000-5000CFU的非目標菌，接種總量1ml，同時接種兩個平行管，混勻。同時分別將目標菌菌懸液（與試管接種同一稀釋度）和非目標菌菌懸液（比試管接種小10-100倍稀釋度）1ml傾注平板，接種兩個平板，作接種量計數用，30±1℃培養18-24小時。

  4、非目標菌接種

  在裝有待測培養基的試管中接種1000-5000CFU的非目標菌，接種量1ml，同時接種兩個平行管，混勻，30±1℃培養18-24小時。

  5、培養液的接種

  5.1混合菌培養液的接種

  用10μL接種環取1環經培養後的混合菌培養液，換線接種到PALCAM上，每管接種一個平板，36±1℃培養24-48小時。

  5.2非目標菌培養液的接種

  吸取10μL經培養後的非目標菌培養液，均勻塗布接種到TSA上，每管接種一個平板。也可使用傾注法進行接種，36±1℃培養18-24小時。

  6、記錄實驗結果

  目標菌在選擇性平板上的菌落應>10CFU，則表示待測液提培養基的生長率良好；非目標菌在非選擇性平板上的菌落<100CFU，則表示待測液體培養基的選擇性為良好。

五、結果觀察與解釋：

  接種以下質控菌株，在30±1℃培養18-24小時：

質控菌株	菌株編號	接種量 （CFU）	方法	質控結果	其他特征
單增李斯特氏菌 大腸埃希氏菌 糞腸球菌	ATCC19115 ATCC25922 ATCC29212	10-100 1000-5000 1000-5000	半定量	在PALCAM上＞10CFU	灰色至黑色菌落，帶有黑色暈環
大腸埃希氏菌	ATCC25922	1000-5000		在TSA上＜100CFU	/
糞腸球菌	ATCC29212	1000-5000		在TSA上＜100CFU	/

圖1-2 李氏菌增菌肉湯（LB2）微生物質控結果

備注：a：單增李斯特氏菌，b：大腸埃希氏菌，c：糞腸球菌，d：空白對照

六、注意事項：

  本培養基僅為細菌鑒定的一部分，需做其他補充試驗。

相關產品：

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相關標準：

GB 4789.30-2016 單核細胞增生李斯特氏菌檢驗 點擊下載

GB 4789.28-2013 培養基和試劑的質量要求 點擊下載

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