1.範圍
本規範規定了化妝品中黴菌和酵母菌數的檢驗方法。
本規範適用於化妝品中黴菌和酵母菌數的測定。
2.定義
2.1 黴菌和酵母菌數測定Molds and yeasts count
化妝品檢樣經過處理,在一定條件下培養後,1g (1mL)檢樣中形成的黴菌和酵母菌總數,藉以判明化妝品被黴菌和酵母菌汙染程度及其一般衛生狀況。
本方法根據黴菌和酵母菌特有的形態和培養特性,在虎紅培養基上,置28℃±2℃培養5d,計算所生長的黴菌和酵母菌數。
3.儀器和設備
3.1 恒溫培養箱:28℃±2℃。
3.2 振蕩器。
3.3 三角瓶:250mL。
3.4 試管:18mm×150mm。
3.5 滅菌平皿:直徑90mm。
3.6 滅菌刻度吸管:10mL、1mL。
3.7 量筒:200mL。
3.8 酒精燈。
3.9 高壓滅菌器。
3.10 恒溫水浴箱。
4培養基和試劑
4.1 生理鹽水
見總則中3.1。
4.2 虎紅(孟加拉紅)培養基
製法:將上述各成分(除虎紅外)加入蒸餾水中溶解後,再加入虎紅溶液。分裝後,121℃高壓滅菌20min,另用少量乙醇溶解氯黴素,溶解過濾後加入培養基中,若無氯黴素,使用時每1000mL加鏈黴素30mg。
成分:
蛋白腖
5g
葡萄糖
10g
磷酸二氫鉀
1g
硫酸鎂(無水)
0.5g
瓊脂
20g
1/3000虎紅溶液(四氯四碘熒光素)
100mL
蒸餾水加至
1000mL
氯黴素
100mg
5操作步驟
5.1 樣品稀釋
見菌落總數測定中5.1。
5.2 取1:10、1:100、1:1000的檢液各2mL,分別注入2個滅菌平皿內,每皿1mL,注入融化並冷卻至45℃±1℃左右的虎紅培養基,充分搖勻。凝固後,翻轉平板,置28℃±2℃培養5d,觀察並記錄。另取一個不加檢液的滅菌空平皿,加入約15mL虎紅培養基,待瓊脂凝固後,翻轉平皿,置28℃±2℃培養箱內培養5d,為空白對照。
5.3 計算方法:先點計每個平板上生長的黴菌和酵母菌菌落數,求出每個稀釋度的平均菌落數。判定結果時,應選取菌落數在5CFU~50CFU範圍之內的平皿計數,乘以稀釋倍數後,即為每g(或每mL)檢樣中所含的黴菌和酵母菌數。其他範圍內的菌落數報告應參照菌落總數的報告方法報告之。
5.4 每g(或每mL)化妝品含黴菌和酵母菌數以CFU/g (mL)表示。