一、瓊脂的作用
瓊脂是由植物中提取的一種多糖,在冷水中不溶解,加熱至90℃左右開始溶解,溶解後的瓊脂在冷卻至40℃左右時開始凝固,性狀穩定,在培養基中做為優良的凝固劑使用。
由於生產瓊脂的工藝、原材料等因素的影響,不同的瓊脂在外觀、顏色、軟硬度上有差別,特別是軟硬度對培養基的影響至關重要。
二、瓊脂的軟硬度對不同培養基的影響
在一些標準中規定的培養基配方中,通常寫明了培養基中使用的瓊脂具體用量,也有些配方寫的瓊脂用量是一個範圍。
雖然瓊脂在培養基中不提供營養,一般也不能被微生物利用,但瓊脂的軟硬度會對微生物的生長以及某些擴散性試驗(如藥敏試驗、抗生素效價測定等)的效果產生間接的影響。因此在GB4789.28中規定,允許根據瓊脂的實際軟硬度調整使用量,在配製培養基時,並不一定要完全按照標準中的配方進行配製,應當根據瓊脂的軟硬度選擇合適的用量。
在觀察動力的半固體培養基中,瓊脂的用量通常為0.4%左右,一些有動力的細菌可以在半固體瓊脂中遊動擴散生長,若培養基硬度偏大,會導致細菌難以擴散生長,觀察不到動力試驗結果。因此,若瓊脂的凝膠強度偏大,應適當降低用量,使培養基的軟硬度在合適的範圍內,可以較好的觀察細菌的動力現象。
在平板培養基中,培養基的軟硬度與細菌的菌落大小、遷移現象有關。若培養基軟硬度較小,培養基內的營養物質容易擴散,有動力的細菌更容易向周圍擴散,這樣的培養基上細菌的菌落直徑會更大一些。若培養基的軟硬度較大,細菌的菌落通常會偏小一點。在進行同種培養基比對時,看到菌落大小不同,許多人會誤認為菌落較大是因為培養基的營養高,質量好,這種觀點是片麵的。雖然培養基軟硬度較低時菌落更容易長大,但缺點是新手劃線接種容易劃破,不好操作。對於計數類培養基(如TSA、營養瓊脂等),若培養基軟硬度偏低,很容易在進行計數培養時由於菌落生長過大出現蔓延或融合遮蓋現象,導致計數結果不準確,反而培養基稍硬一些,菌落略微偏小不容易融合蔓延,更容易計數。因此,在進行配製培養基時,應將軟硬度控製在一定範圍內,一般瓊脂的用量在10-15g之間即可。
注:左側平板含瓊脂0.9%,右側平板含瓊脂3%,測試菌株為金黃色葡萄球菌。
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