一、試驗用途及原理：
用於沙門氏菌和誌賀氏菌、霍亂弧菌生化鑒定。
細菌分解乳糖依靠兩種酶的作用，一種是β-半乳糖苷酶滲透酶，它位於細胞膜上，可送乳糖分子滲入細胞，另一種β-半乳糖苷酶，亦稱乳糖酶，位於細胞內，能使乳糖水解成半乳糖和葡萄糖。
具有上述兩種酶的細菌，能在24-48h發酵乳糖，而缺乏此兩種酶的細菌，不能分解乳糖。乳糖遲緩發酵菌隻有β-半乳糖苷酶而缺乏β-半乳糖苷滲透酶，因而乳糖進入細胞很慢，需經培養基中1%乳糖較長時間的誘導，產生相當數量的滲透酶後，才能較快分解乳糖，故呈遲緩發酵現象。
ONPG可迅速進入細菌細胞，被β-半乳糖苷酶水解，釋放出黃色的臨位硝基苯酚，故由培養液變黃可迅速測知β-半乳糖苷酶的存在，從而確定該菌為乳糖遲緩發酵菌。
二、培養基配方（g/L）：
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1%蛋白腖水 |
750mL |
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ONPG |
1.5g |
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磷酸鹽緩衝液 |
250mL |
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pH 7.5 25℃ |
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三、試驗方法：
1. 將標準儲備菌株接種到非選擇性肉湯中或采用其他製備方法，製成5 McFarland濁度（約109CFU/ml）的菌懸液。
2. 吸取0.05-0.08ml（約1-2滴）至生化管內，36±1℃培養24h後，觀察實驗結果。
四、結果觀察與解釋
接種以下質控菌株，36±1℃培養24h：
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質控菌株 |
菌株編號 |
生長情況 |
其他特征 |
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大腸埃希氏菌 |
ATCC25922 |
+++ |
陽性，培養基變深黃色 |
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霍亂弧菌 |
/ |
+++ |
陽性，培養基變深黃色 |
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福氏誌賀氏菌 |
CMCC(B)51572 |
+++ |
陰性，培養基無色 |
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宋內誌賀氏菌 |
CMCC51592 |
+++ |
陽性，培養基變深黃色 |
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痢疾誌賀氏菌 |
CMCC51252 |
+++ |
陰性，培養基無色 |
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肺炎克雷伯氏菌 |
CMCC46117 |
+++ |
陽性，培養基變深黃色 |
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傷寒沙門氏菌 |
CMCC(B)50071 |
+++ |
陰性，培養基無色 |
圖1-1 ONPG生化管質控結果
五、注意事項
本培養基僅為細菌鑒定的一部分，需做其他補充試驗。
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