濕熱法就是利用水蒸氣的熱量將物品滅菌。濕熱滅菌時，微生物死亡與細胞蛋白質等大分子變性有關，其 Q10值比幹熱滅菌的高，對芽抱 (在100~135℃)約為8~10，對營養細胞則更高，因此，濕熱滅菌比幹熱滅菌更有效。濕熱滅菌具有經濟和快速等特點，廣泛用於培養基和發酵設備等的滅菌。常用濕熱法有以下幾種：
（1）巴斯德消毒法
19世紀60年代，由巴斯德發展起來的。將待消毒的液體食品置於60~85℃下處理15s~30min，然後迅速冷卻。該法主要針對牛奶、啤酒、果酒和醬油等不易長時間高溫滅菌的液體食品。其目的是殺死無芽抱的病原菌(如牛奶中的結核杆菌和沙門杆菌)，但又能保持食品的風味，而且處理後的牛奶等飲料可存放長達 6個月。
（2）煮沸消毒法
將飲用水加熱至100℃，煮沸數分鍾，以達到消毒的目的。在條件有限的情況下，可采用該法消毒物品。
（3）間歇滅菌法，或稱丁達爾滅菌法
在 80~100℃蒸煮15~60min，再擱置室溫(28~37℃)下過夜，並重複以上過程三遍以上。其中蒸煮過程可以殺死微生物的營養體，但不能殺死芽抱，室溫過夜促使芽抱萌發形成營養體，再經蒸煮過程可殺死新的營養體，循環三次以上可以保證徹底殺死包括芽抱在內的微生物。這種方法可以在較低的溫度下，達到徹底滅菌的目的，對設備的要求較低，適用於不耐高溫的物品滅菌，但其缺點是費時。
（4）常規加壓滅菌法
蒸汽加壓滅菌是目前應用最廣、最有效的滅菌手段。實驗室常用高壓蒸汽鍋滅菌，該法適用於一切微生物實驗室、醫療保健單位和工廠菌種室的培養基、器材和其他物料的滅菌。
（5）連續滅菌法
將培養基在發酵罐外按需要連續不斷地加熱、保溫和冷卻，然後送入發酵罐內。一般采用 135~140℃、5~15s短暫的加熱過程，然後需要在維持罐內繼續保溫5~8min，以達到徹底滅菌的目的。
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