一、艱難梭菌簡介
艱難梭菌（Clostridium difficile）一般指艱難梭狀芽孢杆菌，嚴格厭氧菌，對氧氣極為敏感，暴露在空氣中容易死亡，分離培養比較困難，因此起名為艱難梭菌。與產氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、生孢梭菌同為梭狀芽孢杆菌屬，生長條件接近，可在硫乙醇酸鹽流體培養基、庖肉培養基、血平板、哥倫比亞瓊脂等培養基上生長（需嚴格厭氧培養），在紫外燈下有淡黃綠色熒光，不分解卵黃，不凝固牛奶。
二、活化方法
1.硫乙醇酸鹽流體培養基：此培養無需厭氧設備即可培養艱難梭菌，購買的艱難梭菌若為凍幹粉形式，可用0.1%蛋白腖水溶解後，接種至硫乙醇酸鹽流體培養基中36℃左右靜置培養24-48h，可觀察到艱難梭菌在氧化層以下生長。
注：艱難梭菌在硫乙醇酸鹽流體培養基中存活時間較短，觀察到艱難梭菌活化成功後，應在24h內盡快傳代或保存。
2.庖肉培養基：配製時可在培養基表麵覆蓋約7mm厚的液體石蠟隔絕空氣，滅菌後接種艱難梭菌，無需厭氧設備即可培養，36℃培養24-48h。
3.血平板/哥倫比亞瓊脂：將艱難梭菌的凍幹粉溶解後塗布至血平板或哥倫比亞瓊脂平板，迅速放入厭氧培養袋或厭氧培養箱中36℃培養24-48h，艱難梭菌呈淡黃色不規則菌落。
注：艱難梭菌對氧氣極為敏感，因此操作時應盡可能在厭氧操作中進行，若在空氣中操作，應快速進行，接種後立即轉入厭氧環境中培養基，減少氧氣的毒害作用。
三、實驗室保存及複蘇方法
長期保存：普通實驗室可使用甘油法或脫脂牛奶進行超低溫冷凍保存，將培養好的艱難梭菌轉接至液體菌種保存管或脫脂牛奶菌種保存管中（盡可能挑取較多菌苔），用移液槍吹打分散均勻，置-80℃超低溫冰箱或液氮罐中冷凍保存，至少可存活兩年以上。複蘇時，取出菌種保存管，快速解凍，將菌液加入至硫乙醇酸鹽流體培養基/庖肉培養基或塗布至血平板/哥倫比亞瓊脂平板36℃厭氧培養24-48h。
短期保存：將艱難梭菌活化至庖肉培養基中，置於2-8℃冰箱中冷藏保存，艱難梭菌可存活數月，活化時吸取少量菌液轉接至硫乙醇酸鹽流體培養基/庖肉培養基或塗布至血平板/哥倫比亞瓊脂平板36℃厭氧培養24-48h。
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