微生物分離純化方法
錄入時間:2023-3-9 10:50:17
來源：青島betway必威西汉姆联生物
常見的微生物分離純化方法有稀釋混合倒平板法、平板劃線法、稀釋塗布法、稀釋搖管法、液體培養基分離法、單細胞分離法、選擇培養分離法等。其中前三種方法最為常用，不需要特殊的儀器設備，分離純化效果好。
平板劃線法與稀釋塗布平板法的區別
一、平板劃線分離法
用接種環以無菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表麵進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少，並逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經培養後，可在平板表麵得到單菌落。
用途：一般多用於菌種的純化；
優點：可以觀察菌落特征，對混合菌進行分離；
缺點：不能計數；
二、稀釋塗布平板法：
稀釋平板計數是根據微生物在固體培養基上所形成的單個菌落，即是由一個單細胞繁殖而成這一培養特征設計的計數方法，即一個菌落代表一個單細胞。計數時，首先將待測樣品製成均勻的係列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細胞分散開，使成單個細胞存在（否則一個菌落就不隻是代表一個細胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布於平板中的培養基內。經培養後，由單個細胞生長繁殖形成菌落，統計菌落數目，即可計算出樣品中的含菌數。此法所計算的菌數是培養基上長出來的菌落數，故又稱活菌計數。一般用於某些成品檢定（如殺蟲菌劑等）、生物製品檢驗、土壤含菌量測定及食品、水源的汙染程度的檢驗。
用途：一般多用於篩選菌株。一般用於平板培養基的回收率計數。
優點：可以計數，可以觀察菌落特征。
缺點：吸收量較少，較麻煩，平板不幹燥效果不好，容易蔓延。如果菌液密度大的話，長不出單菌落。
a. 樣品稀釋液的製備
（1）將分別盛有9mL無菌生理鹽水的試管，進行編號。
（2）準確稱取待測樣品10g，放入裝有90mL無菌水並放有小玻璃珠的250mL三角瓶中，用手或置搖床上振蕩20 min，使微生物細胞分散，靜置20s-30s，即成10-1稀釋液；
（3）用移液槍吸取10-1稀釋液1mL，移入裝有9 mL無菌水的試管中，吹吸3次，讓菌液混合均勻，即成10-2稀釋液；
（4）再吸取10-2稀釋液1mL，移入裝有9mL無菌水的試管中，也吹吸三次，即成l0-3稀釋液；以此類推，連續稀釋，製成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一係列稀釋菌液。
用稀釋平板計數時，待測菌稀釋度的選擇應根據樣品確定。樣品中所含待測菌的數量多時，稀釋度應高，反之則低。通常測定細菌菌劑含菌數時，采用10-7、10-8、10-9稀釋度；測定土壤細菌數量時，采用10-4、10-5、10-6稀釋度；測定放線菌數量時，采用l0-3、10-4、10-5稀釋度；測定真菌數量時，采用10-2、10-3、10-4稀釋度
b.塗布操作：
(1) 將塗布器浸在盛有酒精的燒杯中。
(2) 取少量菌液（不超過0.1ml）滴加到培養基表麵。
(3) 將沾有少量酒精的塗布器在火焰上引燃，待酒精燃盡後，冷卻8~10s。
(4) 用塗布器將菌液均勻地塗布在培養基表麵，塗布時可轉動培養皿，使菌液分布均勻。
注意：將塗布器末端浸在盛有體積分數為百分之七十的酒精的燒杯中。取出時，要讓多餘的酒精在燒杯中滴盡，然後將沾有少量酒精的塗布器在火焰上引燃。
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