一、弧菌簡介
弧菌(Vibrio)是常存在於河水、湖水、海水等環境中的一類革蘭氏陰性彎杆菌,一些水產品中經常會帶有致病性的弧菌,如霍亂弧菌、副溶血性弧菌、創傷弧菌等,可通過傷口或食道感染,某些血清型的菌株有強烈的毒性(如O1群霍亂弧菌),感染後造成嚴重的症狀,甚至死亡。不同的弧菌具有不同的嗜鹽性,大部分弧菌在含3%左右濃度氯化鈉的培養基中生長旺盛,因此常使用2216E培養基或3%氯化鈉TSA培養弧菌。
二、活化方法
培養基:弧菌的活化常用2216E液體培養、2216E瓊脂或3%氯化鈉胰蛋白腖大豆瓊脂。也可以使用其他非選擇培養基補充氯化鈉至3%左右使用,對於淡水類弧菌,也可以使用TSB、BHI等培養基活化。
操作方法:若菌種為凍幹粉形式,按照說明書溶解後,可直接塗布或劃線至2216E或3%氯化鈉TSA平板上,也可加入至2216E液體培養基中;若菌種為甘油凍存管形式,從冰箱中取出速融後,塗布或劃線至2216E或3%氯化鈉TSA平板上,或加入至2216E液體培養基中;若菌種為瓷珠形式,挑取瓷珠可轉入2216E液體培養基或平板或3%氯化鈉TSA平板上,30-37℃培養1-2天。
注:部分海洋弧菌具有一定嗜冷的特性,如哈氏弧菌,在30-37℃雖然可以生長,但不能表現發光特性,需在25℃以下進行培養2-3天,可觀察到明顯的發光現象。
三、實驗室常用保存方法
1.斜麵保存法
將3%氯化鈉TSA或2216E瓊脂培養基製成斜麵管,接種弧菌後培養至菌落生長良好,置於室溫可保存1-2周。
注:一些弧菌在2-8℃會出現自溶現象,因此一般不在2-8℃保存。
2.甘油/瓷珠冷凍保存法
可挑取培養好的弧菌至弧菌專用菌種液體/瓷珠菌種保存管(通常含有3%的氯化鈉)中製成約109CFU/mL的菌液(瓷珠保存法需搖勻後棄菌液保留瓷珠),置於冰箱或液氮罐中冷凍保存,在-70℃以下可保存兩年以上。
注:一些弧菌生命力相對較弱,在-20℃容易死亡,因此建議進行低溫冷凍保藏時,盡可能在-70℃以下保存。
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