哥倫比亞血瓊脂基礎培養基的原理和使用方法

一、試驗原理

  哥倫比亞血瓊脂基礎（HB0124）營養非常豐富，可用於培養各種營養要求苛刻的細菌。特殊蛋白腖為多種蛋白腖類混合物，提供細菌生長所需的氮源、氨基酸、維生素及生長因子，促進營養要求苛刻的細菌生長；可溶性澱粉提供碳源；氯化鈉維持平衡的滲透壓；瓊脂是凝固劑。

  本培養基使用時需配套添加無菌脫纖維羊血（1001339-1）使用。脫纖維羊血中含有蛋白質和生長促進因子。進一步保障營養要求苛刻的微生物生長，如鏈球菌等。血液添加入含瓊脂培養基中，不僅可促進微生物快速生長繁殖，也可以觀察溶血現象，不同的細菌都有其特定的溶血環，可據此對細菌進行一定程度的鑒別。

二、培養基配方（g/L）

三、試驗方法

  1、稱取本品39.0g，加熱溶解於1000mL蒸餾水中，分裝，121℃高壓滅菌15分鍾，冷卻至50℃左右時，加入5%-10%無菌脫纖維羊血，混勻備用。

  2、準備質控菌株，接種至哥倫比亞血瓊脂上。

  3、放置於36℃±1℃恒溫培養箱中，需氧培養18h-24h。

四、質控結果

  接種以下質控菌株，按規定的適宜條件培養後，菌株培養結果見圖1。

質控菌株	菌株編號	接種量（CFU）	方法	質控結果
蠟樣芽孢杆菌	CMCC(B) 63303	/	定性	菌落周圍產生β溶血環
金黃色葡萄球菌	ATCC 6538	/	定性	菌落周圍產生β溶血環
乙型溶血性鏈球菌	CMCC(B) 32210	/	定性	菌落周圍產生β溶血環
肺炎鏈球菌	ATCC 6305	/	定性	菌落周圍產生α溶血環

圖1 哥倫比亞血瓊脂基礎培養基的微生物質控結果

五、注意事項

  1、培養基中含少量澱粉，若滅菌前未加熱煮沸溶解，滅菌後冷卻可能出現少量白色沉澱。

  2、無菌脫纖維羊血需置於2℃-8℃進行保存，在試驗過程中，無菌脫纖維羊血要提前拿出使其自然恢複至室溫後再使用，以免與瓊脂溫差過大，導致羊血與液態瓊脂混合時瓊脂接觸到低溫羊血瞬間凝固產生瓊脂塊影響平板製備效果。

  3、培養基在加入無菌脫纖維羊血時，要注意培養基溫度，避免過高或過低，以45℃-50℃為宜，可通過恒溫水浴鍋進行溫度控製。同時要控製好錐形瓶搖動混勻的力度，以免產生較多氣泡，影響所製平板的外觀質量和使用效果。可閱讀相關文章：《光潔平整不產氣泡的血平板怎麽製作》進一步了解學習。

  4、因哥倫比血瓊脂營養成分及其豐富，十分利於各種細菌微生物生長，故在製備及使用哥倫比亞血瓊脂的過程中請務必注意無菌操作，以免造成雜菌汙染，影響試驗結果。

  5、無菌脫纖維羊血產品源自羊血液製得，故保質期較短（1個月），建議在選購本產品時充分考慮試驗所需用量，避免一次性過多購入導致產品超保質期失效。為保證效果穩定，盡量避免同一瓶無菌脫纖維羊血反複取用（2℃-8℃保存/恢複室溫），這可能導致血液成分加速氧化、失活，也會帶來更大的雜菌汙染風險，無菌脫纖維羊血在出現變色後應避免再次使用。

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