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菌種保藏的原理和方法



錄入時間:2023-12-12 15:54:55 來源:青島betway必威西汉姆联生物

1、菌種保藏原理

選用優良的純種,最好是休眠體(分生孢子、芽孢等),創造一個是微生物代謝不活潑,生長繁殖受抑製,難以突變的環境條件。其環境要素是幹燥、低溫、缺氧、缺營養以及添加保護劑等。


2、菌種保藏常用方法

1)定期移植保藏法

將菌種接種於適宜的斜麵或液體培養基,也可進行穿刺培養,待生長成健壯的菌體(對數期細胞、有性孢子或無性孢子)後,將菌種放置4℃冰箱保藏,每間隔一定時間需重新移植培養一次。芽孢杆菌每 3~6個月移種一次,其他細菌每月移種一次。此方法最早使用且至今仍普遍使用。

2)液體石蠟保藏法

在生長良好的斜麵表麵覆蓋一層無菌的液體石蠟,液麵高出培養基1cm,將其置試管架上以直立狀態低溫保藏。此方法是定期保藏法的補充。

3)沙管保藏法、土壤保藏法

取河沙過24目篩。用10%-20%的鹽酸沒泡除去有機質,洗滌,烘幹,分裝入安瓿管,加塞滅菌。需要保藏的菌株先用斜麵培養基培養,再用無菌水製成細胞或孢子懸液,將10滴懸液注入裝有洗淨、滅菌河沙的沙管內,使細胞或孢子吸附在沙上,放到幹燥器中吸幹沙中的水分,將幹燥後的沙管用火焰熔封管口。可以室溫或低溫保藏。土壤法以土壤代替河沙,不需酸洗,經風幹、粉碎、過24目篩,分裝滅菌後,同上製備。此法適用於芽孢杆菌,梭狀芽孢杆菌、放線菌和一些絲真菌的保藏。

4)麩皮保藏法

或稱曲法保藏,將麩皮(也可用各種穀物代替)水或其他培養基成分以一定的比例拌勻,加水或培養液與麩皮的比例為1:0.81:11:1.5,原則是按照不同菌種對水分要求不同而定。將拌勻的麩皮分裝在試管或安瓿管等容器中,裝入的麩皮應保特疏鬆,不要緊壓。高溫滅菌後,將隨種的孢子液接入。適宜溫度下培養,直至長出菌絲。再放在幹燥器中幹燥後,20℃以下溫度保藏。也可將小管用火焰熔封。常用於放線菌和黴菌的保藏。

5)蒸餾水保藏法

每個試管中裝5ml滅菌的無菌水,用接種針從斜麵或平板上挑取一環菌種細胞,接入蒸餾水中並使之懸浮,試管用無菌的橡皮塞塞緊,放置10℃低溫保藏。需用時,可從管內移出一環接到培養基上,而原來的管加塞後仍可繼續保藏。此法是最簡單的保藏方法。

6)冷凍幹燥保藏法

將菌液在凍結狀態下升華其中水分,最後獲得幹燥的菌種樣品。此方法是目前被廣泛推崇的方法。

7)液態超低溫保藏法

將菌種懸浮封存於圓底安瓿管或塑料的液氮保存管(材料應耐受較大溫差驟然變化)內,放到-196~-150℃的液氮罐或液氮水箱內保藏。此方法已被公認為當前最有效的菌種長期保存技術之一,適用範圍最廣的微生物保藏法。

8)甘油保藏法

菌種懸浮在10%(體積分數)甘油蒸餾水,置低溫(-80~70℃)保藏。實際中,常將待保藏菌培養至對數期的培養液直接加到已滅過菌的甘油中,並使甘油的終濃度在10%~30%左右,再分裝於小離心管中,置低溫保藏。基因工程常用此法保藏。

 

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