生物學指標檢驗是營養類原材料最主要和最關鍵的指標,直接關係培養基的質量好壞。原材料生產廠家和培養基生產廠家都應重點進行檢測。主要檢測的指標有可發酵糖試驗、H2S試驗﹑靛基質(吲哚)試驗、V-Р試驗﹑生長試驗﹑色素試驗﹑菌落總數檢測和耐熱芽孢杆菌總數等。
2．H2S試驗
稱取樣品1.0g、氯化鈉0.5g、蒸餾水或去離子水100mL，配製成溶液，調節其pH值至7.2～7.6,分裝於試管中,每管6.0mL,121℃高壓滅菌15min後,接種鼠傷寒沙門氏菌的18h～24h的新鮮培養物,將醋酸鉛(PbAc)試紙插人試管中,試紙下端距離液麵2cm～3cm,蓋好試管蓋30℃～35℃培養24h~48h,觀察結果。陽性結果:醋酸鉛試紙條變黑，且黑色域不得小於0.5cm。陰性結果:醋酸鉛試紙條不變黑或黑色域小於0.5cm。
3．靛基質(吲哚)試驗
稱取樣品2.0g、氯化鈉0.5g,蒸餾水或去離子水100mL,配製成溶液，調節其pH值至7.2～7.6,分裝於試管中,每管6.0mL,121℃高壓滅菌15min高壓滅菌後,分別接種大腸埃希氏菌、鼠傷寒沙門氏菌的18h～24h 的新鮮培養物,35℃±2℃培養18h～24h。觀察結果時每管加入2～4滴靛基質試劑。10s內液麵上出現玫瑰紅色環者為陽性,出現黃色者為陰性。大腸埃希氏菌應為陽性,鼠傷寒沙門氏菌呈陰性。
4．V-P試驗
稱取樣品0.7g、葡萄糖0.5g、氯化鈉0.5g,加100mL的蒸餾水或去離子水配製成溶液,調節其pH值7.2～7.4,以每管6.0mL分裝115℃高壓滅菌15min後,分別接種產氣腸杆菌,大腸埃希氏菌的18h~24h新鮮培養物,35℃±2℃培養18h～24h。觀察結果時，除去試管帽,依次加入VP試劑甲、乙液，甲液6滴,乙液2滴,混合均勻,放置36℃培養箱孵育30min,溶液變紅色為陽性,不變色為陰性。產氣腸杆菌呈陽性反應,大腸埃希氏菌呈陰性反應。
5．色素試驗
稱取樣品2.0g、氯化鈉0.5、瓊脂1.2g,加入100mL的蒸餾水或去離子水中,加熱完全溶解,調節pH值7.2～7.4,121℃高壓滅菌15min高壓滅菌後,待溫度降到50℃左右時傾注平板﹐充分凝固後﹐四區劃線接種金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞杆菌的新鮮培養物,35℃±2℃培養18h~24h,觀察結果,應生長良好,金黃色葡萄球菌有黃色色素生成﹐銅綠假單胞菌有綠色色素生成。
6．生長試驗
(1)質控菌株2)操作方法:製備好的固體培養基，用記號筆成90°交叉劃線分成四份，依次滴加10mL，濃度為104CFU/mL、105CFU/ml、106CFU/ml、107CFU/ml的質控菌株菌液(見圖4-5-1),輕輕搖動,待菌液吸幹後倒置於35℃±2℃培養18h～24h。同時用合格品做對照品,樣品應與對照品結果基本一樣或優於對照品時，判為合格。
7．菌落總是檢測
稱取25g樣品溶解於225mL無菌蒸餾水或去離子水後，製成10倍係列稀釋液，選取兩三個適宜稀釋度，吸取1mL樣品液塗布於平板計數瓊脂(PCA)平板上,36℃±1℃培養48h±2h計數結果,需做2個重複。
8．耐熱芽孢杆菌檢測
稱取25g樣品溶解於225mL無菌蒸餾水或去離子水後,製成10倍係列稀釋液，選取兩三個適宜稀釋度，吸取lmL樣品液塗布於葡萄糖胰蛋白豚瓊脂平板上,55℃±1℃培養48h±2h計數結果﹐需做⒉個重複。主要營養類原材料的生物學檢驗指標見表4-5-2。
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原材料 名稱 |
可發酵 糖試驗 |
H2S 試驗 |
靛基質 (吲哚)試驗 |
V-P 試驗 |
色素 試驗 |
生長 試驗 |
菌落總數 /(CFU/g) |
耐熱芽孢杆菌 總數/(CFU/g) |
|
肉蛋白腖 |
- |
+ |
+/- |
+/- |
+/+ |
合格 |
＜5000 |
0 |
|
大豆蛋白腖 |
- |
+ |
+/- |
+/- |
+/+ |
合格 |
＜5000 |
0 |
|
酪蛋白腖 |
- |
+ |
+/- |
+/- |
+/+ |
合格 |
＜5000 |
0 |
|
明膠蛋白腖 |
- |
+ |
+/- |
+/- |
+/+ |
合格 |
＜5000 |
0 |
|
酵母浸出粉 |
- |
// |
// |
// |
// |
合格 |
＜5000 |
＜10 |
|
牛肉浸出粉 |
- |
// |
// |
// |
+/+ |
合格 |
＜5000 |
＜10 |
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注:“-”表示陰性反應，“＋”表示陽性反應,“//”表示不檢測此項指標，靛基質試驗中:大腸埃希氏菌與鼠傷寒沙門氏菌用“/”分開表示，V-P試驗中:產氣腸杆菌與大腸埃希氏菌用“/”分開表示，色素試驗中:金黃色葡萄球菌與銅綠假單胞菌用“/”分開表示。 |
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