一、稀釋液的原理及成分
稀釋液主要用於樣品的製備,使樣品均勻分散開,樣品中的菌落能夠均勻懸浮於稀釋液中,並維持菌落數在短時間內相對穩定,以便於後續的監測。對於含有抑菌成分的樣品,可在稀釋液中加入對應的中和劑成分,消除抑菌成分的影響。對於厭氧菌的稀釋時,可在稀釋液中加入少量的還原性成分(如半胱氨酸),減少氧氣的毒害作用。對於油性的樣品,可在稀釋液中加入表麵活性劑(如吐溫80)幫助溶解分散均勻。
稀釋液通常由氯化鈉、磷酸鹽、蛋白腖、還原劑、中和劑等成分中的一種或幾種組成,氯化鈉主要維持滲透壓,磷酸鹽維持pH的相對穩定,少量的蛋白腖有助於維持細菌的活力,還原劑可幫助形成厭氧化解,中和劑可消除抑菌成分的抑菌效果。
二、常用的稀釋液選擇
1.0.85%-0.9%氯化鈉溶液(生理鹽水)
配製簡單,實驗室最常用,對於一般細菌或真菌菌懸液的製備、偏中性樣品液的製備,均可使用,不具有增殖效果,製備好的菌懸液可在驗證的效期內使用。
2.磷酸鹽緩衝液
效果與生理鹽水相似,具有一定的緩衝效果,通常使用pH7.2的磷酸鹽緩衝液,對於pH偏酸或偏堿的樣品,也可選用其他pH的磷酸鹽緩衝液製備,不具有增殖效果,製備好的菌懸液可在驗證的效期內使用。
3.0.1%蛋白腖水
成分為1g/L蛋白腖,相比較於生理鹽水,0.1%蛋白腖水更有利於一些脆弱細菌的存活(如厭氧菌等),稀釋產氣莢膜梭菌、雙歧杆菌等細菌時,效果要優於生理鹽水。因蛋白腖有增殖效果(時間久了細菌會繁殖變多),因此用0.1%蛋白腖水製備的菌懸液需及時使用,一般細菌建議在45min內使用,厭氧菌應在15min內使用。
4.pH7.0氯化鈉蛋白腖緩衝液
相比較於0.1%蛋白腖水,增加了少量的磷酸鹽起到緩衝作用,效果與0.1%蛋白腖水相似,更多用於藥品懸液製備,也可製作細菌懸液,具有增殖效果,製備的菌懸液建議在45min內使用(厭氧菌應在15min內使用)。
5.半胱氨酸稀釋液
主要成分有氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、碳酸鈉、半胱氨酸組成,無增殖效果,通常用於厭氧菌的稀釋和樣品製備。
6.蛋白腖-鹽溶液
由氯化鈉和少量蛋白腖組成,具有增殖效果,與0.1%蛋白腖水效果相似,一般用於芽孢數測定樣品製備,也可用於一般樣品或菌懸液的製備。
7.明膠磷酸鹽緩衝液
由明膠和磷酸鹽組成,一般用於肉毒梭菌檢驗樣品的製備。
8.卵磷脂吐溫稀釋液
由少量蛋白腖、卵磷脂和吐溫80組成,卵磷脂和吐溫80具有中和防腐劑的作用,通常用於含防腐劑樣品懸液的製備。
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