GB4789.28 培養基與試劑的質量要求2024版即將施行。相比較與2013版本,改動還是比較大的,最主要的還是檢驗方法和測試菌株的改動。主要改動內容如下:
(1)商品化即用型培養基條款增加了測試片的質控要求;
(2)水的電導率數值修正,電阻率由≥0.4MΩ/cm更正為≥0.04MΩ/cm。
(3)培養基的分裝:由原來的“容器體積至少比培養基體積大20%”改為“培養基體積應不超過容器容積的2/3”。若培養基裝量過滿,滅菌降溫過程以及出鍋搖勻過程可能由於培養基暴沸溢出,且不利於混合均勻。
(4)5.1.1培養基和試劑評估具體指標刪除(主要是理化項目),不再需要詳細做每個項目了,不同實驗室可以根據需求和自身能力評估對主要的質量指標進行質量控製。
(5)考慮到許多食品企業和實驗室並不具備驗收培養基質量的條件和能力,同時新標準刪除了原本簡單的驗收方法,使培養基的驗收與出廠檢驗操作相同,因此新版中明確了在生產商提供第三方實驗室的檢驗報告的情況下,使用者可根據需求選擇是否對培養基進行重複測試。
(6)刪除了即用型培養基微生物汙染控製檢驗項目。對於使用者來說,通常購買到即用型產品時,產品已經生產了有一段時間,從外觀上大致可以判斷出有無汙染出現,在進行檢驗時通常也會引入空白對照,在一定程度上也相當於進行了微生物汙染的控製檢驗。然而對於生產商來說,即使標準刪除了這個項目,為了確保產品的無菌性,生產商依然會對此項目進行質控。
(7)刪除了實驗室驗收商品化培養基的質控方法。這個項目是最大改動之一,這是因為原本的驗收方法是比較粗略的,有時候並不能準確反應培養基的質量,因此隻保留了檢驗結果更準確的培養基出廠檢驗方法,培養基的出廠檢驗和驗收需使用相同的方法。
(8)培養基質量控製-固體培養基的接種量改動:原本接種量為20-200CFU,新標準明確寫出每平板細菌和酵母菌的接種量為50-250CFU,每平板黴菌的接種量為30-150CFU。經過驗證,接種量在50-250CFU之間的結果相對穩定,且容易計數,而黴菌由於容易擴散生長,因此限定了不同的接種量。
(9)培養基的質量控製-固體培養基的特異性測試接種方式改動:由原來的劃平行直線更改為分區劃線,因為分區劃線更容易得到單菌落,從密集到稀疏可以更準確觀察菌落的生長特征,而平行直線劃法有時不容易分離到單個菌落,且不美觀。
(10)培養基的質量控製-選擇性增菌培養基的目標菌接種改動:原標準要求接10-100CFU的目標菌+1000-5000CFU非目標菌的混合菌,培養結束後劃線接種選擇性平板計數,現改為隻需接種10-100CFU的目標菌,培養結束後塗布接種選擇性平板計數。
(11)附錄C中的菌種保存推薦凍存液更改,由原來的含10-15%甘油的TSB改為含40-60%甘油的BHI做為冷凍保存培養基。
(12)附錄D中的原料成分說明更改,如各種蛋白腖的說明、浸粉類、膽鹽等成分名稱更適合現狀。(如牛肉膏、酵母浸膏等成分,現市場是都廣泛使用牛肉浸粉、酵母浸粉代替,保存期長,使用方便)
(13)新增了參比培養基概念:做為培養基計數的對照培養基,真菌使用SDA做為參比培養基,乳酸菌使用MRS做為參比培養基,常規細菌使用TSA做為參比培養基(一些特殊細菌的參比培養基也是由TSA改進的,如弧菌使用TSA+2.5%氯化鈉製成3%TSA做為參比培養基),參比培養基的驗收有著嚴格的質控菌株要求。
(14)測試菌株的改動。目前隨著國家的發展,國內也已經有了較為成熟的菌種保存方法和一些較大的菌種保藏中心,建立了自身較為完善的菌種庫。此次標準修訂主要新增的CMCC菌株和CICC菌株等也是經過驗證,可以等效代替ATCC的菌株進行培養基的質量控製,以後無需花費巨額財力購買國外的菌株了,可以在國內多家保藏中心直接購買。
(15)部分菌株名稱更改:如CICC6032由原來的“德氏乳杆菌保加利亞亞種”更改為“瑞士乳杆菌”,嬰兒雙歧杆菌改為長雙歧杆菌嬰兒亞種等,總共有約20個菌株名稱發生變動。
(16)部分培養基的質量要求更改,涉及培養基較多,有些是時間上的改動,如原本培養24h改為18-24h,培養時間更為靈活。有些是對照培養基改動,如空腸彎曲菌的參比計數培養基更改為TSA+5%裂解血,梭菌的參比計數培養基更改為TSA+5%脫纖維血。還有像HE瓊脂,改動較大,刪除了大腸埃希氏菌質控,福氏誌賀氏菌改為定性接種。原標準血平皿質控菌株蠟樣芽胞杆菌質控α溶血已更正,改為用肺炎鏈球菌質控α溶血,而新增的TSSB使用蠟樣芽胞杆菌質控β溶血。
(17)新增27個培養基的質量控製和4個PCR試劑盒的質量控製。隨著GB4789係列標準的完善,培養基的數量也會逐漸增加和完善。
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