一、版本概況
GB4789.4食品中沙門氏菌檢驗標準從1994版到即將實施的2024版,總共經曆了6個版本的更新。與2016版本相比,2024版本主要在一些操作細節、使用培養基的調整及鑒定方法做了變更,預計將在2024年8月份正式實施。
二、變更內容
1.樣品預增菌改動
(1)增加乳粉檢驗前處理的說明,25g乳粉加入至225mL BPW液體表麵,暫不調整pH也不混勻,室溫靜置60±5min後再混勻,36℃培養16-18h。此操作是經過實驗室驗證,有助於受損沙門細菌的恢複,減少對沙門氏菌的損傷,提高檢出率。
(2)冷凍產品的解凍溫度由45℃以下更改為40-45℃,2-5℃更改為2-8℃,主要是更加貼合冰箱的冷藏溫度。
2.選擇性增菌步驟改動
(1)RVS替代原來的SC培養基,一方麵是因為SC培養基裏麵的亞硒酸氫鈉有劇毒,對人體健康和環境危害比較大,且儲存不穩定易分解,另一方麵受社會現狀的影響,目前疾控監測傷寒沙門氏菌導致的發病率並不高,適合傷寒沙門氏菌生長的SC相對來講適用性不是很強了,更換為RVS培養箱相應也可以提高檢出率(RVS具有更強的選擇性,抑製雜菌的效果要強於SC)。同時培養溫度變為42℃,接種體積變為0.1mL。
(2)TTB培養溫度增加了可選擇36±1℃進行培養,主要是考慮到了樣品背景菌的影響。對於進行一定加工過的樣品,通常背景菌含量較少,幹擾性不強,在36±1℃培養即可。而對於背景菌含量相對較高的樣品(如生鮮禽肉等),雜菌的幹擾性相對較大,提高至42℃培養可以在一定程度上減少雜菌的繁殖,提高檢出率。
(3)增加了預增菌液(BPW)允許在2-8℃冷藏保存不超過72h再進行選擇性增菌,通過驗證,此操作對最終檢出率沒有顯著影響,也是考慮到企業現狀,如果遇到休班或者其他原因不能當天及時檢驗等情況,可以暫存在2-8℃冰箱內冷藏待檢。
3.分離步驟改動
增加了選擇性增菌液(TTB和RVS)允許在2-8℃冷藏保存不超過72h,再轉接選擇性平板進行分離培養,原因同上。
4.生化鑒定步驟改動
(1)挑取菌落數由原來的選擇性平板分別挑取2個菌落更改為總共挑取4個以上的典型菌落,且宜選擇來自不同增菌液和不同選擇性平板上的菌落,同時也允許先對一個可疑或典型菌落進行鑒定,若不是沙門再對其他可疑菌落進行鑒定。新標準的方法更具有靈活性,可疑根據實際的檢驗結果來進行選擇鑒定,同時也能減少工作量,降低檢驗成本,節約試劑。
(2)生化鑒定出現A1反應時,增加血清學鑒定後報告結果,出現A3反應補做ONPG後,也要加血清學鑒定後報告結果。表5的生化群和生化反應進行了擴充,新標準列出7個亞種,相比較於原標準,增加了明膠酶、酒石酸鹽、半乳糖醛酸、γ-穀胺酰轉肽酶,β-葡糖醛酸苷酶、黏液酸、乳糖、O1噬菌體裂解試驗。在進行判定上與原標準基本上沒有改動,隻是增加了項目。
5.血清鑒定:主要在H抗原鑒定上,詳細寫出了簡易平板法、小玻管法和小套管法操作方法。
6.培養基配方改動
(1)TTB:成分沒有改變,但基礎液體積由原來的1050mL更改為1000mL,滅菌溫度由121℃20min更改為加熱煮沸滅菌,pH由7.0±0.2更改為7.6±0.2。名稱2024版存在一點問題,前後不一致,前半部分內容使用的名稱為“四硫磺酸鈉煌綠增菌液”,附錄名稱為“四硫磺酸鹽煌綠增菌液”。
(2)新增RVS配方,刪除SC。
(3)HE、BS、XLD、TSI等培養基一些成分名稱做了規範化更改(如牛肉膏改為了牛肉浸粉,酵母膏改為了酵母浸粉),傾注平板的溫度都由50-55℃調整為48±2℃,個別培養基的瓊脂量做了固定,總體變化不大,對培養基使用和效果沒有影響。
(4)蛋白腖水配方中補加了色氨酸,蛋白腖用量減少至10g,主要是增加的色氨酸可以生成更多的吲哚,有利於陽性結果的觀察。
(5)氰化鉀試驗要求在試驗管覆蓋石蠟,目的是阻止氰化鉀揮發失效導致出現假陽性結果。
注:本文屬betway必威西汉姆联生物原創,未經允許不得轉載。
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