一、試驗原理
溶血性鏈球菌（Streptococcus hemolyticus）在自然界中分布較廣，是一種常見的病原微生物，呈球形或橢圓形，該菌不形成芽孢，無鞭毛，易被普通的堿性染料著色，革蘭氏陽性菌，需氧或兼性厭氧菌，營養要求較高。鏈球菌根據其對紅細胞的溶解作用程度不一，又可分為α（甲）、β（乙）、γ（丙）三型。其中β-溶血性鏈球菌，具有完全溶血作用，其在血平板上生長產生的溶血素可在菌落周圍形成一個2 mm-4 mm、界限分明、完全透明的無色溶血環。α-溶血性鏈球菌，具有不完全溶血作用，其菌落周圍出現1 mm-2 mm的草綠色溶血環。γ-溶血性鏈球菌不產生溶血素，無溶血環。
溶血性鏈球菌廣泛存在於水、空氣、塵埃、糞便及健康人和動物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通過直接接觸、空氣飛沫傳播或通過皮膚、粘膜傷口感染，被汙染的食品如奶、肉、蛋及其製品也會對人類進行感染。溶血性鏈球菌通常通過以下途徑汙染食品：①食品加工人員及其他直接接觸人員有化膿性炎症時手口鼻接觸或空氣飛沫汙染；②食品原材料帶菌，如畜禽局部化膿；③熟製品因包裝不善而使食品受到汙染。被汙染的食品會使人類通過直接接觸或皮膚、黏膜傷口等多種方式感染，危害極大，其中β溶血性鏈球菌危害最大，故常用草酸鉀兔血漿檢驗該菌。
用途：用於β型溶血性鏈球菌的鏈激酶試驗（GB 4789.11-2014 β型溶血性鏈球菌檢驗）。
原理：β型溶血性鏈球菌群能產生鏈激酶，該酶能使血液中的纖維蛋白酶原變成纖維蛋白酶，而後溶解纖維蛋白，使血凝塊溶解，為陽性反應。
二、主要組成成分
凍幹兔血漿、草酸鉀
三、試驗方法
1、按箭頭方向掀開並撕下鋁箔蓋，每支西林瓶中加入1 mL滅菌生理鹽水輕微搖晃至完全溶解，然後吸取全部草酸鉀兔血漿轉移至滅菌的空試管中。
2、加入經36℃±1℃培養18h-24h的可疑菌的TSB培養液0.5mL及0.25%氯化鈣溶液0.25mL，振蕩搖勻。
3、置於36℃±1℃水浴中10min，血漿混合物自行凝固（凝固程度至試管倒置，內容物不流動）。
4、放置36℃±1℃恒溫培養箱中繼續培養24h，觀察凝固的血漿是否能夠重新溶解液化，凝固的血漿重新完全溶解為陽性，不溶解為陰性，β型溶血性鏈球菌為陽性。
四、質控結果
接種以下質控菌株，放置36℃±1℃恒溫培養箱中，需氧培養24h。結果如圖1所示。
|
質控菌株 |
菌株編號 |
方法 |
質控結果 |
|
溶血性鏈球菌 |
CMCC(B) 32210 |
定性 |
陽性（液化） |
|
大腸埃希氏菌 |
ATCC 25922 |
定性 |
陰性（不液化） |
|
金黃色葡萄球菌 |
ATCC 25923 |
定性 |
陰性（不液化） |
圖1 凍幹草酸鉀兔血漿的微生物質控結果
五、注意事項
1、凍幹草酸鉀兔血漿在使用前需觀察是否變質，變質常表現為有凝塊，加入生理鹽水後不能呈完全溶解狀態，該狀態草酸鉀兔血漿不能使用，會影響後續結果判斷。
2、加入可疑菌培養物和氯化鈣後應水浴至血漿凝固才能繼續培養，若不能凝固則不能進行後續試驗判斷。
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