一、試驗原理：
克羅諾顯色培養基是青島betway必威西汉姆联生物公司根據GB4789.40-2024生產的培養基，用於嬰幼兒配方食品、嬰幼兒輔助食品、乳及乳製品及其原料中克羅諾杆菌的檢驗。克羅諾杆菌顯藍—綠色菌落，其它菌顯無色或黃色。
胰蛋白腖和酵母浸粉提供氮源、維生素、生長因子；氯化鈉維持滲透壓；瓊脂為凝固劑；脫氧膽酸鈉主要抑製革蘭氏陽性菌的生長，檸檬酸鐵銨和硫代硫酸鈉可使產硫化氫的非目標菌呈現黑色，阪崎克羅諾杆菌可特異性分解底物5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃葡糖甙使菌落顯藍-綠色，其他不產硫化氫、不分解底物的菌一般顯無色或黃色。
二、培養基配方（g/L）：
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胰蛋白腖 |
7.0 |
|
酵母浸粉 |
3.0 |
|
氯化鈉 |
5.0 |
|
檸檬酸鐵銨 |
1.0 |
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硫代硫酸鈉 |
1.0 |
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脫氧膽酸鈉 |
0.25 |
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5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃葡糖甙 |
0.15 |
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瓊脂 |
15.0 |
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pH 7.3±0.2 25℃ |
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三、試驗方法：
粉體裝培養基的使用：
1. 稱取本品6.48g加入200ml蒸餾水，加熱煮沸完全溶解，121℃高壓滅菌15分鍾，冷卻至50℃左右時，傾入無菌平皿。
2. 輕輕混勻mLST-Vm肉湯培養物，用10ul接種環挑取1環增菌液劃線接種於克羅諾杆菌顯色培養基平板，接種2個平板。
3. 倒置放入培養箱36℃±1℃培養24h±2h，典型的克羅諾杆菌為藍 - 綠色菌落。
4. 挑取可疑菌落劃線接種於TSA平板36℃±1℃培養24h±2h，做PCR鑒定或生化鑒定。
四、結果觀察與解釋
接種以下質控菌株，36℃±1℃培養24h±2h：
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質控菌株 |
菌株編號 |
接種量(CFU) |
質控評定標準 |
其他特征 |
|
阪崎克羅諾杆菌 |
ATCC 29544 |
50-250 |
PR≥0.5 |
藍綠色菌落 |
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鼠傷寒沙門氏菌 |
ATCC 14028 |
/ |
/ |
無色，有黑色中心 |
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普通變形杆菌 |
CMCC(B) 49027 |
/ |
/ |
灰色至黑色菌落 |
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金黃色葡萄球菌 |
ATCC 6538 |
/ |
G≤1 |
/ |
|
糞腸球菌 |
ATCC 29212 |
/ |
G≤1 |
/ |
圖1-2 克羅諾顯色培養基微生物質控結果
備注：a：阪崎克羅諾杆菌 b:鼠傷寒沙門氏菌 c：普通變形杆菌d：金黃色葡萄球菌e：糞腸球菌
五、注意事項
本培養基僅為細菌鑒定的一部分，需做其他補充試驗。
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