厭氧細菌，是指能夠在無氧條件下生活的一類細菌。其又分為兼性厭氧菌（在有氧或無氧環境中均能生長的細菌）和專性厭氧菌（氧氣對其有毒害作用，隻能在沒有氧氣的環境中才能生長）。本文主要介紹專性厭氧菌在培養時應注意的細節。

  經常會有客戶谘詢我們關於厭氧培養的問題，例如為何自己購買的厭氧菌株培養不出來；分離培養厭氧菌時，應該如何培養，應選擇何種培養基。往往排除掉其設備問題（如厭氧培養箱自身的問題）和試劑問題後，發現是在厭氧培養的某些細節上出現了問題，導致厭氧培養效果不佳。

  在培養基選擇方麵，若參考的標準有明確指出使用何種培養基，則應使用相應的培養基進行培養。若無明確指出應使用的培養基，一般建議使用HB8518-1 GAM培養基，該培養基營養豐富，且含有硫乙醇酸鈉和L-半胱氨酸有助於維持培養基的無氧環境，隻需在表層覆蓋一層石蠟便可達到較好效果。若需要培養的細菌對營養要求不高且實驗室不具備厭氧培養所需的環境或缺少石蠟等試劑，則可使用HB5190 液體硫乙醇酸鹽培養基，該培養基培養厭氧菌時無需覆蓋石蠟，也無需將培養基放在厭氧培養袋或厭氧培養箱中。

   在培養基的配置過程中，若使用液體培養基，則盡量在高壓滅菌之前分裝試管，若需覆蓋石蠟的培養基也推薦在滅菌前添加。因為配置後的液體中含有較多的溶解氧，而高壓滅菌時，這些溶解在液體中的溶解氧則會排出。若在滅菌結束後分裝試管或再覆蓋石蠟，則會讓氧氣重新進入液體之中，有可能會造成厭氧菌無法生長。這點在配置液體硫乙醇酸鹽培養基時非常明顯，因培養基含有氧氣指示劑刃天青，若在錐形瓶中高壓滅菌後分裝試管，則會觀察到試管通體呈粉紅色（表示有氧氣存在），需靜置待到試管重新分層或加熱驅氧後使用。若已經因操作不當導致液體中溶解氧過多，可不覆蓋石蠟（因為石蠟會阻止液體和空氣的氣體交換，即使外部為無氧環境也不能讓液體中氧氣排出），選用透氣性較好的試管塞，直接將試管置於厭氧培養箱或厭氧培養袋中使用。

液體硫乙醇酸鹽培養基頂部粉紅色的氧化層，生孢梭菌隻在氧化層之下生長

　若使用固體培養基進行分離培養，則應注意自己所用的空平皿透氣性是否良好，若平皿蓋與平皿本身連接過於緊密，則可能導致在厭氧培養時平皿內氧氣封閉在平皿內，造成厭氧菌生長不佳。

  最後，應選擇品質可靠的厭氧包，保證其在短時間內便可使厭氧培養袋中達到無氧環境。若使用厭氧培養袋或培養盒則在培養之前應確保厭氧培養袋封口扣緊、厭氧盒盒蓋扣緊，且使用了對應體積的厭氧包去除袋中氧氣（如使用2.5L培養袋則應選用2.5L厭氧產氣包），一般厭氧包都留下了部分體積餘量，可以確保所標體積的空間達到無氧狀態。此處應補充說明的是，若需要微需氧環境培養，則需要使用固定體積的培養盒，因為微需氧產氣包進行了精確的計算，若使用不固定體積的厭氧培養袋，則可能會達不到相應的氣體環境。

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