亞硫酸鹽瓊脂培養基試管製備方法—鐵粉沾到試管壁上了怎麽辦？

一、簡介與問題

  亞硫酸鹽瓊脂培養基主要用於厭氧亞硫酸鹽還原杆菌的試管計數。使用該培養基時，需要加入鐵粉，培養時目標菌產生的H₂S與之反應，形成黑色的區域。由於鐵粉需要使用人員單獨加入，有客戶反饋加入鐵粉滅菌後，很多鐵粉沾在試管壁上，即使用力搖晃也不能完全脫落。本文就此以對比試驗的方式進行說明展示。

二、試驗設置

  共設三組試驗，第一組為試管中先加入培養基，再加鐵粉；第二組為試管中先加入培養基，上麵覆蓋一層液體石蠟，再加鐵粉（設置該組試驗，是為了驗證本公司另一個需要加入鐵粉的產品-皰肉培養基即用型管的情況）；第三組為試管中先加入鐵粉，使鐵粉盡量不要粘附在試管壁上，然後再加入培養基。上述操作全部完成後，進行高壓滅菌。

三、試驗結果

  （1）滅菌前，第一組的鐵粉全部在培養基上麵；第二組部分鐵粉沉到試管底部，部分鐵粉透過液體石蠟留在培養基上麵，液體石蠟表麵也粘附一些鐵粉；第三組鐵粉全部在試管底部（如圖1）。

圖1 滅菌前三組試管中鐵粉的狀態

（從左到右依次為第一組、第二組、第三組）

  （2）滅菌後，不搖晃，第一組和第二組試管壁上粘附了很多鐵粉，第三組試管壁上基本沒有（如圖2）。

圖2 滅菌後三組試管中鐵粉的狀態

（從左到右依次為第一組、第二組、第三組）

  （3）滅菌後的試管進行搖晃，前兩組試驗試管上麵浮著的鐵粉會分散到培養基中，但是試管壁上粘附的鐵粉很難脫落（如圖3）。

圖3 搖晃後三組試管中鐵粉的狀態

（從左到右依次為第一組、第二組、第三組）

  通過上麵的試驗，可以看出，在製備這款培養基試管時，建議先加入鐵粉，且使鐵粉全部落在試管底部，盡量不要粘在試管壁上，然後再加入培養基，進行滅菌操作。

四、怎樣使鐵粉分散

  試管中先加入鐵粉，再加培養基，然後高壓滅菌，滅菌完畢，鐵粉依然沉積在試管底部，隻要趁熱充分振蕩試管，即可分散到整個試管中（如圖4）。

圖4 沉積的鐵粉混勻前後的狀態

五、建議方法與要領

  如果配製的試管比較多，逐個試管加入鐵粉會顯得稍微繁瑣，也可以采用下麵幾種辦法，達到上麵所說的效果。

  （1）將鐵粉直接加入待煮培養基中，攪拌均勻，進行煮沸溶解，趁熱分裝，分裝時要不停攪拌。這種情況下，不管涼水中先放入鐵粉，還是熱水中加入鐵粉，滅菌後鐵粉會分布在培養基所占體積的試管壁上，底部相對多一些（如圖5）。

圖5 鐵粉與培養基一起攪拌溶解、滅後的狀態

  （2）如果配製前忘記加鐵粉，待培養基煮好後，也可以加入鐵粉充分攪拌後，分裝、滅菌，這樣滅菌後，鐵粉也會集中在試管底部，趁熱搖勻，鐵粉也能分散到整個試管中（如圖6）。

圖6 鐵粉直接加入煮後的培養基中及滅菌後的狀態

  綜上，不管用哪種方式，隻要保證滅菌前，鐵粉不是漂浮在試管中的培養基上表麵，且滅菌完畢後，及時趁熱混勻，鐵粉就能分散到試管中的培養基中，不會沾到試管上部的壁上，保證使用效果。

六、使用注意事項

  在加樣時，需要趁熱將樣品加入試管中，顛倒數次，在沸水或蒸汽櫃中放置15min（加熱過程中也需顛倒試管數次），加熱後迅速用水冷卻試管，待試管內培養基完全凝固後，將試管預熱至50℃-55℃厭氧培養48 h。有關結果判斷，參考亞硫酸鹽瓊脂-點擊查看。

相關產品：

亞硫酸鹽瓊脂-點擊查看

注：本文屬betway必威西汉姆联生物原創，未經允許不得轉載。

上一篇：關於藥典中TSB培養基使用常見問題

下一篇：三種支原體固體平板計數法