一、試驗原理：

  本產品符合GB 4789.28-2024 《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 培養基和試劑的質量要求》。

  胰腖、多價腖和酵母膏提供氮源、維生素和生長因子；李斯特氏菌可耐受較高含量的氯化鈉，同時對部分雜菌起抑製作用；磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉為緩衝劑；七葉苷為可發酵的糖類；萘啶酮酸和吖啶黃為選擇性抑菌劑，抑製非李斯特氏菌的生長。

二、培養基配方（g/L）：

三、試驗方法：

  粉體裝培養基的使用：

  1. 稱取本品49.4g， 加熱攪拌溶解於1000ml蒸餾水中，分裝， 121℃高壓滅菌15分鍾，冷卻後備用。LB1液：每225ml培養基中加入1支萘啶酮酸（5.0mg/支）和1支吖啶黃素（3.0mg/支）

  2. 在無菌條件下分裝試管，每支試管10ml。

  3. 製備質控菌液。

  4. 目標菌的接種。

  接種10CFU~100CFU的單核細胞增生李斯特氏菌，接種體積不超過1mL，同時接種兩個平行管，混勻。將相同體積的目標菌菌懸液(與試管接種同一稀釋 度) 傾注平板(或適宜稀釋度0.1mL塗布平板) ，接種兩個平板，作接種量計數用 。30℃需氧培養24h。

  5. 非目標菌的接種

  接種1000CFU~5000 CFU的大腸埃希氏菌、糞腸球菌 ，接種體積不超過1mL，同時接種兩個平行管，混勻。同時將1mL菌懸液(比試管接種小10倍~100倍稀釋度)傾注平板(或適宜 稀釋度0.1mL 塗布平板)，接種兩個平板，作接種量計數用，30℃需氧培養24h。

  6.培養液的接種

  培養結束後，吸取10μL單核細胞增生李斯特氏菌培養液塗布至PALCAM瓊脂，每管一個平板，置於36℃需氧培養48h。

  吸取10μL大腸埃希氏菌/糞腸球菌培養液分別塗布於TSA平板，每管一個平板，置於36℃需氧培養24h。

四、結果觀察與解釋

  接種以下質控菌株，30℃需氧培養24小時：

質控菌株	菌株編號	接種量(CFU)	測試結果	質控評價標準
單核細胞增生李斯特氏菌	ATCC 19115	10-100	在PALCAM平板上菌落數多不可計；菌落呈灰綠色，中心凹陷黑色，周圍有黑色	在PALCAM上>10CFU 灰色至黑色菌落，帶有黑色暈環
大腸埃希氏菌	ATCC 25922	1000-5000	在TSA平板上菌落數為0/0	在TSA上<100CFU
糞腸球菌	ATCC 29212	1000-5000	在TSA平板上菌落數為0/0	在TSA上<100CFU

圖1-1 李氏增菌肉湯LB1培養基微生物質控結果

備注：a:單核細胞增生李斯特氏菌，b:大腸埃希氏菌，c:糞腸球菌

圖1-2  10μL單核細胞增生李斯特氏菌培養液塗布至PALCAM瓊脂

五、注意事項

  本培養基僅為細菌鑒定的一部分，需做其他補充試驗。

相關產品：

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