常見的細胞平衡鹽溶液介紹及選擇

一、常見的細胞平衡鹽溶液

  平衡鹽溶液（Balanced salt solution, BSS）是細胞學實驗中必不可少的試劑，常用於哺乳動物細胞在體外環境時的短期維持，也可用作細胞衝洗液。BSS通常是無機鹽的組合或混合物，成分主要包括鈉、磷酸鈉、鉀、鈣、鎂和氯化物等。鉀和鈉調節滲透性和張力，而鈣和鎂可以保持細胞膜和內部結構的完整性，通過添加磷酸鹽和碳酸氫鹽，平衡鹽溶液還能平衡環境pH的波動。有些BSS還會添加葡萄糖，為細胞提供能量。

  細胞培養的平衡鹽溶液包括：PB磷酸緩衝液（Phosphate buffer solution，PB）、PBS磷酸緩衝鹽溶液（Phosphate-buffered saline, PBS）、杜氏磷酸緩衝鹽溶液（Dulbecco's phosphate-buffered saline, DPBS）、Hank's平衡鹽溶液（Hank's balanced salt solution, HBSS）、Earle's平衡鹽溶液（Earle's balanced salt solution, EBSS）和格氏平衡鹽溶液（Geys balanced salt solution, GBSS）等。

  PB緩衝液通常由磷酸二氫鈉（NaH₂PO₄）和磷酸氫二鈉（Na₂HPO₄）配製而成，另外也有使用磷酸鉀鹽配製（即K₂HPO₄或KH₂PO₄），其配製方法和緩衝液能力與磷酸鈉緩衝液相同。PB緩衝液的緩衝pH值範圍非常廣泛，可配製各種pH值的酸性、堿性和中性緩衝液，通常在pH為5.7-8.0之間使用。PB緩衝溶液在化學反應、合成反應等化學領域中有廣泛應用，在部分抗體製劑中也有應用，但如果用其衝洗細胞，則可能會導致細胞低滲吸水，甚至脹破。

  PBS緩衝液具有與PB緩衝液相同的緩衝對：H₂PO_4-和HPO₄^2-，與PB緩衝液不同的是PBS添加了氯化鈉和氯化鉀來增加鹽離子濃度。PBS緩衝液通常在pH為7.2-7.4使用，具有鹽平衡、調節滲透壓和一定的pH緩衝作用。DPBS是生物學、生物化學研究中使用較廣泛的一種平衡鹽溶液，DPBS和PBS的成分相同，但DPBS的Na₂HPO₄與KH₂PO₄的添加量略小。另外一部分文獻將該PBS緩衝液寫成D-PBS緩衝液，並強調是不含鈣、鎂離子的配方。DPBS主要用於胚胎學方麵的研究，可作為胚胎、組織、細胞的漂洗液、凍存液和培養液。可根據需要在D-PBS中加入葡萄糖、丙酮酸鈉等，以維持培養物的基本營養。

   Hank's平衡鹽溶液是生物學實驗中最常用的平衡鹽溶液，主要成分為NaCl，KCl，KH₂PO₄，Na₂HPO₄，NaHCO₄和葡萄糖，具有維持滲透壓、保持pH穩定、提供簡單營養等作用。HBSS可用於多種細胞培養應用，如漂洗組織塊、器官或細胞，運輸細胞或組織，稀釋細胞計數，以及配置其他試劑等。從成分上來說，Hank's緩衝液與D-Hank's緩衝液的一個主要區別在於D-Hank's緩衝液不含有鈣離子和鎂離子，原因在於鈣離子、鎂離子會抑製胰蛋白酶活性，因此不含鈣離子、鎂離子的Hank's平衡鹽溶液（D-Hank's）還可用於細胞解離前清洗以及配製胰蛋白酶消化液。與PBS和DPBS相比，Hank's緩衝液更複雜，Hank's溶液中磷酸鹽含量要低一些，因為該溶液添加的碳酸氫鈉可以起到pH調節的作用，此外，該緩衝液還添加了葡萄糖，可為細胞提供簡單的營養。

  Earle's平衡鹽溶液，是細胞分離或培養中常用的磷酸鹽緩衝液之一。EBSS專為CO₂環境中的細胞短期維持而設計，主要成分為葡萄糖，NaHCO₃，NaCl，KCl和Na₂HPO₄，具有維持滲透壓、保持pH穩定、提供簡單營養等作用，可用於體外實驗中組織塊、器官或細胞的漂洗、細胞或組織的運輸、細胞培養用試劑的配製以及作為細胞計數的稀釋液，也可用於誘導細胞自噬等領域。HBSS和EBSS兩者都是多數培養基的基礎溶液，主要區別是緩衝能力不同。HBSS的NaHCO₃含量較低（0.35克/升），其緩衝能力較弱，一般用空氣平衡，即利用空氣中的CO₂使溶液pH值平衡。EBSS含有高濃度的NaHCO₃（2.2克/升），其緩衝能力較強，溶液pH值需在5％的CO₂培養箱中才能達到平衡。如果希望在CO₂培養箱中保存組織，需要用EBSS。如果僅僅是清洗將要在細胞培養基中儲存的組織，選擇HBSS液即可。

  此外，EBSS和HBSS都可以選擇含或不含鈣鎂離子及酚紅的溶液，使用時應根據實驗的需要進行選擇。酚紅的添加主要是指示溶液的酸堿度變化，但由於酚紅會幹擾流式細胞檢測，一般在做流式細胞檢測時，使用無酚紅產品。鈣鎂離子會抑製胰蛋白酶的活性，故含有鈣鎂離子的緩衝液通常用作運送介質、試劑的製備；不含鈣鎂離子的緩衝液，通常用於細胞清洗。值得注意的是含有葡萄糖和碳酸氫鈉（NaHCO₃）的溶液不能進行高壓滅菌，如果是自行配製，應選擇過濾除菌，如果是直接訂購產品，要注意進行無菌分裝。

二、產品展示

  青島高科技工業園betway必威西汉姆联生物技術有限公司生產的PBS和DPBS緩衝液產品，均采用過濾除菌工藝，在百級潔淨室中進行無菌灌裝，每批產品均已通過無菌測試，並且經過嚴格的質量控製測試，確保產品性能和批次間一致性，亦進行了pH、滲透壓、內毒素等測試，非常適合在細胞培養中使用。

  我公司生產的的PBS和DPBS緩衝液產品如圖1，內毒素含量不超過0.01EU/mL，檢測結果如圖2，詳情請參考：PBS和DPBS緩衝液產品。

圖1 商品化的PBS和DPBS緩衝液

圖2 內毒素檢測結果

1~5：濃度分別為0EU/mL、0.01EU/mL、0.025EU/mL、0.05EU/mL和0.1EU/mL的內毒素標準液檢測結果；6：我公司生產的PBS產品內毒素檢測結果。

相關產品：

磷酸鹽緩衝液PBS（pH7.2）（細胞緩衝液）-點擊查看產品詳情

Dulbecco's磷酸鹽緩衝液（DPBS）（不含氯化鈣和氯化鎂）-點擊查看產品詳情

注：本文屬betway必威西汉姆联生物原創。未經允許不得轉載。

上一篇：常見問題答疑（培養結果與觀察1）

下一篇：正交試驗法在植物組培技術中的應用