一、試驗用途及原理

  腸道菌增菌肉湯（EE Broth, EE）主要用於腸杆菌科細菌的增菌培養。

  蛋白腖提供蛋白質、維生素和氨基酸；葡萄糖提供碳源；磷酸氫二鈉和磷酸二氫鉀為緩衝劑；牛膽鹽和煌綠為選擇性抑菌劑，抑製非腸杆菌科細菌的生長。

  多數腸道菌對膽鹽和煌綠有較強的耐受性，可在此培養基中生長，部分細菌可分解葡萄糖大量產酸，煌綠由綠色變成黃色；一些細菌還可分解葡萄糖產氣，在培養基上方產生大量氣泡；不發酵葡萄糖或發酵葡萄糖產酸較弱的細菌生長後，培養基仍為綠色；革蘭氏陽性菌和多數非腸道菌群受膽鹽和煌綠的抑製，在此培養基中不生長或生長差。

二、培養基配方（g/L）

三、試驗方法

  1、稱取本品45g，加熱攪拌溶解於1000mL純化水中，分裝三角瓶，每瓶90mL，100℃水浴加熱30min進行滅菌，該培養基無需高壓滅菌。

  2、培養基滅菌結束後，搖動均勻，之後迅速在流動的冷水中冷卻。培養基冷卻至室溫後，用移液器分裝入試管，每管9mL，備用。

  3、製備質控菌株，做10倍係列稀釋，選擇適宜稀釋度的菌懸液，接種至培養基中，並做空白對照。

  4、放置於36℃±1℃恒溫培養箱中，需氧培養18h-24h。

四、質控結果

  接種以下質控菌株，放置於36℃±1℃恒溫培養箱中，需氧培養18h-24h。試驗結果如圖1所示。

質控菌株	菌株編號	接種量（CFU）	生長情況	其它特征
大腸埃希氏菌	ATCC 25922	10-100	+++	渾濁，變黃
陰溝腸杆菌	ATCC 23355	10-100	+++	渾濁，變黃
鼠傷寒沙門氏菌	ATCC 14028	10-100	+++	渾濁，變黃
金黃色葡萄球菌	ATCC 25923	100-1000	-	抑製

A:陰性對照 B:大腸埃希氏菌 C:陰溝腸杆菌 D:鼠傷寒沙門氏菌 E:金黃色葡萄球菌

圖1 腸道菌增菌肉湯（EE）培養基的質控菌株培養結果

五、試驗注意事項

  1、使用非一次性試管等容器進行試驗時，應對容器進行無菌處理，以免增加試驗的不確定性或汙染。

  2、滅菌結束後，注意拿三角瓶瓶口側部，避免掌心緊握瓶口上部，以免被燙傷。

  3、對該培養基進行分裝時應注意無菌操作，避免汙染，必要時可采用過濾除菌方式進行分裝。

  4、該培養基無需高壓滅菌，滅菌後顏色呈綠色，若采用121℃滅菌15min，該培養基可能會產生褪色變黃現象。

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