《中國藥典》中質控菌株的管理解析

  ——《中國藥典》2020版第四部，9203藥品微生物實驗室質量管理指導原則：菌種

一、菌株的來源和複蘇

  “藥品微生物檢驗用的試驗菌應為有明確來源的標準菌株，或使用與標準菌株所有相關特性等效的可以溯源的商業派生菌株。

  標準菌株應來自認可的國內或國外菌種保藏機構，其複蘇、複壯或培養物的製備應按供應商提供的說明或按已驗證的方法進行。”

  在中國藥典中，質控菌株大多數使用CMCC中國醫學微生物菌種保藏中心來源的標準菌株，購買後按照使用說明書進行複蘇和保存，做為標準儲備菌株。從其他的商業機構也可買到對應編號的菌株，是由商家自行傳代製作，隻能做為儲備菌株或工作菌株使用。在初次進行菌株複蘇時，應仔細閱讀說明書，選擇適宜的培養基，接種後放置於適宜的溫度和氣體條件下進行培養（多數細菌可以使用TSB/TSA在30-35℃培養，厭氧菌可使用硫乙醇酸鹽流體培養基、血平皿之類的在30-35℃進行厭氧培養，真菌可以使用SDA/SDB在20-25℃培養3-5天）。

二、菌株的確認和保存

  複蘇後的菌株應進行純度和特性的確認，可通過菌落形態觀察是否有汙染現象，通過革蘭氏染色可初步確認複蘇的菌株是否有問題，通過生化鑒定或其他手段對菌株的特性進行記錄，確認複蘇的菌株正確無誤，采用適宜的方法保存菌株。

  對於大多數實驗室，建議使用-70℃以下的超低溫冰箱長期保存標準儲備菌株，使用-30℃以下保存儲備菌株（溫度越低越好），可采用甘油凍存、瓷珠凍存、脫脂牛奶凍存等方法，也可使用凍幹粉、載體保存等方法（需要特定設備，一般實驗室可能不具備）。

  冷凍的菌株一旦解凍轉種，不能再次冷凍和使用。

  注：菌株特性確認可能需要數天時間，而菌株的保存宜使用新鮮的菌株，因此菌株的鑒定和保存可以同時進行。

三、菌株的傳代

  直接從菌種保藏中心獲得的菌株，一般可認為是零代菌株（有說明的除外），複活後為第一代菌株，每一次的轉接或活化培養都是一次傳代，工作菌株使用一般不能超過5代。使用過程發現菌株出現老化、變異、汙染等問題時應停止使用並及時銷毀。

  菌種需做定期傳代，特別是采用斜麵冷藏等方式時，菌種保存時間較短，需及時轉接傳代。而采用超低溫冷藏保存的菌株，可以大大延長保存時間數年甚至數十年，不需要頻繁傳代，但需要定期做菌種確認（即純度和特性檢驗，確保菌株正確，且沒有變異老化等現象出現）。

四、菌株的銷毀

    出現老化變異等現象的菌株、使用後的菌株、檢驗後帶菌的樣品等，需采用有效手段進行殺滅銷毀（如高壓蒸汽滅菌），防止存活的菌株傳播到周圍的環境中。

五、菌種信息管理

    實驗室應建立完整的菌種文件和記錄。內容包括菌株的申購、進出、收集、貯藏、確認、轉種、使用以及銷毀等全過程，每支菌種都應注明其名稱、標準號、接種日期、傳代數，並記錄菌種生長的培養基和培養條件、菌種保藏的位置和條件等信息。通常實驗室應有台賬（記錄菌種接收相關信息）、菌株保存記錄、菌株活化/傳代記錄、菌種確認記錄（記錄活化、菌株形態、生化鑒定等信息）、菌種使用記錄、菌株銷毀記錄等。

參考文獻：

《中國藥典》2020版第四部，9203藥品微生物實驗室質量管理指導原則：菌種。

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