不染色標本一般用於觀察細菌動力及運動情況,因為不染色標本直接在普通光學顯微鏡下,不能清楚看到細菌的形態與結構特征。細菌未染色時無色透明,在顯微鏡下主要靠細菌的折射率與周圍環境不同進行觀察。有鞭毛的細菌在鏡下呈活潑有方向的運動,無鞭毛的細菌則呈不規則布朗運動。常用的方法有壓滴法、懸滴法。
1、實驗材料
(1)菌種 變形杆菌6—12h肉湯培養物、葡萄球菌6—12h肉湯培養物。
(2)玻片 普通玻片、凹玻片、蓋玻片。
(3)其他 吸管、酒精燈、接種環、凡士林等。
2、實驗方法
(1)懸滴法
①取2張潔淨凹玻片,在凹窩四周塗少許凡士林。
②用接種環各取 ! 環變形杆菌、葡萄球菌培養物分別置於兩片蓋玻片中央。
③將凹玻片倒合於蓋玻片上,使凹窩中央正對菌液。
④迅速翻轉載玻片,用小鑷子輕壓,使蓋玻片與凹窩邊緣粘緊封閉,以防水分蒸發。
⑤先用低倍鏡找到懸滴邊緣,再換高倍鏡,觀察時應下降聚光器,縮小光圈,減少光亮,使背景較暗易於觀察。
(2)壓滴法
①用接種環取2—3環菌液置於潔淨載玻片中央。
②用小鑷子夾1塊蓋玻片輕輕覆蓋在菌液上,放置蓋玻片時應注意,先將蓋玻片的一端接觸菌液,緩緩放下。以免產生氣泡。
③先用低倍鏡觀察,找到細菌所在部位後再換高倍鏡觀察,看細菌能否運動。
3、實驗結果
變形杆菌有鞭毛,運動活潑,可向不同方向迅速運動。葡萄球菌無鞭毛,不能做真正運動,隻能在一定範圍內做位移不大的顫動,這是受水分子撞擊而呈分子運動(布朗運動)。
檢查細菌動力時需注意區分真正運動和分子運動,前者是由於細菌鞭毛引起的有方向性的位移。而後者是因水分子撞擊細菌而引起的布朗運動,隻在原地顫動,無鞭毛的細菌僅有此種分子運動。另外,需注意標本片製好後應盡快觀察,以免水分蒸發影響觀察結果。
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