細菌標本經染色後，與周圍環境在顏色上形成鮮明的對比，可在普通光學顯微鏡下觀察細菌的形態特征。
1、實驗材料
（1）染色液結晶紫溶液、盧戈碘液、95%酒精、稀釋石炭酸複紅液。
（2）菌種大腸杆菌和葡萄球菌6—12h肉湯混合培養物。
（3）其他普通玻片、酒精燈、接種環等。
2、實驗方法
（1）細菌標本片製備
①塗片。取一張潔淨載玻片，將變形杆菌液體培養物直接塗布於載玻片上；或先在載玻片上放置一接種環生理鹽水，再取固體培養基上少許葡萄球菌與生理鹽水磨勻，塗成直徑1cm大小的區域。取菌量不可太多，使鹽水磨成灰白色為宜。
②幹燥 。塗片最好在室溫下自然幹燥，或將標本麵向上，置於酒精燈火焰高處慢慢烘幹，切不可放在火焰上燒幹。
③固定。幹燥後的標本片迅速通過火焰3次，既可達到殺菌的目的，又能固定細菌在玻片上，以免玻片上細菌在染色中被衝洗掉。
（2）染色
①初染。滴加結晶紫液2—3滴於塗片上，作用1min後，用細流水衝洗，甩幹。
②媒染。滴加盧戈碘液數滴於塗片上，作用1min後用流水衝洗，甩幹。
③脫色。滴加95%酒精數滴，輕輕晃動玻片，使玻片上流下的酒精液無紫色為止（時間靈活掌握，大約0.5min左右），用流水衝洗，甩幹。
④複染。滴加稀釋石炭酸複紅液數滴，作用1min後，用流水衝洗，甩幹。最後用吸水紙印幹標本片或 自然幹燥後，玻片上滴加鏡油，用顯微鏡油鏡觀察。
3、實驗結果
葡萄球菌最後被染成紫色，呈葡萄狀排列；變形杆菌被染成紅色，單個散在分布。
4、影響因素
（1）操作因素塗片太厚或太薄，菌體分散不均勻，可影響染色結果。固定時避免菌體過分受熱。脫色時間要根據塗片厚薄靈活掌握。
（2）染液因素：所有染液應防止水分蒸發而影響濃度，特別是盧戈碘液久存或受光作用後易失去媒染作用。脫色酒精以95%濃度為宜，若瓶密封不良或塗片上積水過多，可使酒精濃度下降而影響其脫色能力。
（3）細菌因素：不同時間培養物，革蘭染色結果有差異，如葡萄球菌幼齡菌染成紫色，而老齡菌可被染成紅色。細菌染色時一般用18—24h的細菌培養物為宜。
上一篇：細菌不染色標本檢查法
下一篇：細菌染色標本檢查法—抗酸染色法—萋-尼抗酸染色法1
