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莢膜染色法— 實驗方法



錄入時間:2008-11-14 15:14:49 來源:青島betway必威西汉姆联生物

   
(1)黑斯莢膜染色法 
①在莢膜菌塗片上(在空氣中 自然幹燥,無需加熱固定)放一小塊濾紙片,之後滴加結晶紫染液。 
②在火焰上微微加熱,使玻片上染液 冒蒸汽為止。 
③用200g/l硫酸銅水溶液衝洗染液,切勿用流水衝洗。用吸水紙吸幹後油鏡檢查。 
結果:菌體呈紫色,莢膜呈淡紫色或無色。 
(2)密爾莢膜染色法 
①製片。常規法製片,幹後加熱固定。 
②染色。加石炭酸複紅液。微加熱染1min,水洗。 
③媒染。加特殊媒染劑,作用0.5min,水洗。 
④複染。加堿性美藍液,染1min,水洗。 
⑤鏡檢。幹後油鏡檢查。 
    結果:菌體呈鮮紅色,莢膜呈藍色。 
(3)奧爾特莢膜染色法塗片、自然幹燥、火焰 固定後滴加染液,經火焰加溫使染液產生蒸汽後,繼續染3min,水洗,待幹,鏡檢。 
    結果:菌體呈赤褐色,莢膜呈黃色。 
(4)濕墨水負染法 
①加一滴墨水於潔淨的載玻片上,然後挑取少量菌體與其混合均勻。 
②將一潔淨蓋玻片蓋在混合液上,然後在蓋玻片上放一張濾紙,輕輕按壓以吸去多餘的混合液。加蓋玻片時勿產生氣泡,以免影響觀察。 
③高倍鏡或油鏡檢查。 
   結果:背景灰色,菌體較暗,在菌體周圍呈現明亮的透明圈。 
(5)幹墨水負染法 
①加一滴60g/l葡萄糖液於潔淨載玻片的一端,然後挑取少量菌體與其混合,再加一環墨水,充分混勻。 
②另取一端邊緣光滑的載玻片作推片,將推片一端的邊緣置於混合液前方,然後稍向後拉,當推片與混合液接觸後,輕輕左右移動,使之沿推片接觸的後緣散開,爾後以大約30°角迅速將混合液推 向玻片另一端,使混合液鋪成薄層。 
③空氣中自然幹燥 。 
④用甲醇浸沒塗片固定1min,棄去 甲醇。 
⑤在酒精燈上方用文火幹燥 。 
⑥用甲基紫染1—2min。 
⑦用自來水輕輕衝洗,自然幹燥 。 
⑧高倍鏡或油鏡檢查。 
  結果:背景灰色,菌體紫色,菌體周圍為清晰透明的莢膜。 
(6)石炭酸複紅液染色法 
①取培養了72h的莢膜菌製成塗片,自然幹燥(不可用火焰烘幹)。 
②滴加1—2滴95%酒精固定(不可加熱固定)。 
③加石炭酸複紅染液染色1—2min,水洗,自然幹燥 。 
④在載玻片一端加一滴墨水,用一塊邊緣光滑的載玻片與墨水接觸,再以勻速推向另端,塗成均勻的一薄層,自然幹燥 。 
⑤幹燥後用油鏡觀察。 
   結果:菌體紅色,莢膜無色,背景黑色。

 

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