一、藥敏試驗目的
選擇治療藥物
鑒定細菌
流行病學的調查
耐藥菌株的監測
注意：敏感度可預測的菌，常駐菌、汙染菌、不應做藥敏試驗
二、敏感和耐藥的定義
敏感：常用藥量愈期有效 MIC低於抗菌藥物治療濃度的下限
耐藥：常用藥量愈期無效 MIC高於抗菌藥物治療濃度的上限
人體血清內抗菌藥物濃度與不同菌株MIC的關係
1、敏感與耐藥的分界根據藥理學和抗菌藥物MIC而定
2、不同藥物對不同細菌的分界點不一致
3、敏感與耐藥是在一定條件下的相對概念
三、方法學介紹：原理、方法、結果判斷、報告方式
（一）稀釋法：
1、試管法 液體稀釋法 P104 〈定量〉
2、平皿法 固體稀釋法 P106
（二）擴散法：常用方法 P100 〈定性〉
（三）stokes法
1、稀釋法，平皿的優點：可同時接種多個菌
可發現混合菌株
可觀察接種物的生長善狀況
測待測菌同時必須做對照菌株的參照
目的：監測菌株生長環境及試驗條件
稀釋法三步驟：標準 測試 判斷
報告方式：直接報MIC，是敏感還是耐藥
MIC，結合血清或體液中抗菌藥物濃度，判斷是敏
感還是耐藥
2、擴散法：方法 P101
測被測菌同時須做質控菌株的參照，以監測試驗條件是否合格
步驟：標準 測試 結果判斷
影響因素及其引起常見錯誤差的原因：P103
1）影響結果的主要因素
培養基：A厚度4mm， B拮抗物，C Ca2+ .Mg2+ 濃度
被檢菌接種量（濃度）：0.5麥氏比濁管 （1.5億/ mL）
活菌
含藥紙片：A 藥量 B 抗菌活性
2）注意事項
紙片距平板邊緣15mm，各紙片中心相距24mm
實驗室試驗條件經標準菌株監測穩定後，不要輕易變動
擴散慢的藥物（ex：多粘菌素，磺胺等），S可報告，R
可稀釋法重做，以免出現假耐藥
生長慢的細菌不適合做擴散（ex草綠色鏈球菌）
藥敏試驗不能在CO2 缸內孵育 CO2+H2OÕ H2 CO3 影響PH
°結果讀取法 NCCLS標準
±中度敏感為緩衝地帶一般不報告
A：為了避免誤差〈中介度〉
B：加大劑量或患病部位
比血清的血藥濃度高
可應用
1、混合菌生長
2、可能是變形杆菌
3、藥物擴散慢
有高度耐藥菌杆株出現
藥物選擇性壓力à敏感菌株，耐藥菌株，藥物
逐漸無效
粘質沙雷出現，雙環現象報R
3、stokes法：
外圈，接種敏感的質控菌
裏圈，接種被檢菌
兩菌交接處貼合抗菌素的紙片，35°C孵育16-18h
優點：抵消瓊脂間的誤差
抵消紙片的誤差
用自身對比來判斷結果，抵消結果判斷的誤差
敏感N-3
中介度N-3>c>3
耐藥c£3
注：S和R分界點的判斷表：
適用絕大多數需氧菌和兼性厭氧菌
基本適用鏈球菌、嗜血杆菌、淋球菌
擴散法不適用於厭氧菌
稀釋法和擴散法的比較
稀釋法 擴散法
菌株MIC 直接測出 間接測出
操作方法 繁 簡單
用於擴散慢的抗菌藥 適合 不適合
用於生長慢的菌 適合 不適合
測出值 倍比 連續
絕對擴散法和比較擴散法的對比
絕對擴散法 比較擴散法
敏感和耐藥的 NCCLS標準或廠商指定 用NCTC標準菌株做
分界點 固定的分界點 擴散法後，算出分界點
根據實驗的條件而波動
對藥敏試驗的 要求嚴格，必須按NCCLS 不太嚴格，試驗條件波動
要求條件 或廠商指定的紙片含藥量 對結果影響較小，可由實
規定的培養基等試驗條件 驗室自行配製培養基和選
才能使用分界點表，否則 擇試驗條件影響結果
耐藥菌株產生了各種破壞抗生素的鈍化酶
耐藥菌 鈍化酶
青黴素 葡萄球菌，G- 杆菌 ß內酰胺酶，酰胺酶
頭孢菌素 G- 杆菌 頭孢菌素內酰胺酶
鏈黴素 G- 杆菌 鏈黴素磷酸轉移酶，鏈黴素
腺苷轉移酶
卡那黴素 G- 杆菌，綠膿杆菌 卡那黴素磷酸轉移酶，卡那
黴素已酰轉移酶，卡那黴素
腺苷轉移酶
4、測內酰胺酶P115
1）微生物法：培養基上塗對青黴素菌株，貼1U青黴素紙片
劃上一個不含內酰胺酶的菌株作陽性對照內酰胺酶菌株處有
35°C孵育16-18h （-）圓形抑菌環 （+）抑菌環在含內酰胺酶菌株處有凹陷
2）快速方法：產色頭孢菌素法
測酸的方法
測碘的方法 青黴素酸爭奪碘 絕à無色
臨床意義：
微生物法普遍適用。準確，簡便，費時，是參考方法
產色頭孢菌素法：對葡萄球菌，淋球菌，嗜血杆菌，腸球菌，卡他布
蘭漢氏菌適用。
產酸：對腸球菌，卡他布蘭漢不適用。
產碘：對淋球菌適用
說明：對腸杆菌科，假單胞菌，其他G-需氧菌測內酰胺酶無意義。因其結果不能說明常用的內酰胺類藥物對該菌的敏感性。
為了說明準確測出葡萄球菌是否產生內酰胺酶應用誘導酶法（1ug/片）Ｏxicillin紙片抑菌帶邊緣取菌做試驗。
四、聯合藥敏試驗
1、適應症：病原菌不明的感染
單一藥物不能控製的混合感染
全身性綠膿杆菌感染
藥物不易滲入部位eg:cns.csf
長期用藥可能產生耐藥的感染 eg:結核，慢性骨髓炎
病原菌為多耐藥菌株
2、方法學：
1）擴散法： P107 圖12-3
Q聯合用藥選擇協同作用或累加作用
2）稀釋法 棋盤法P108
結果報告：組合藥物對被檢菌有效的最低濃度
選擇原則：組合的藥物濃度比對被檢菌有效，距中毒濃度又較遠。
3）聯合用藥殺菌試驗
五、血清中抗菌濃度測定
1、目的：有效治療
血藥濃度
計算抑菌商數IQ=----------------
MIC
2、適應藥物及對象，治療濃度和中毒濃度接近的藥
P111 心肝腎功受損者
需大劑量治療者
對抗菌藥利用差者
選擇投藥時間 使血藥量維持在有效量
3、血藥濃度測定：試管 抗菌素倍比稀釋 MIC.8mg/ml
血清倍比稀釋 MIC 1/4血清
血藥濃度32ug/ml
單
血：
已知抗菌素稀釋成4個A、B、C、D，對稱貼紙片
x:未和血清抗菌素含量
Q對數值（log2）間隔一樣Q可用方格紙代替對數坐標紙做圖可通過做好的圖，查出X的濃度
血濃度報告單需知項目：
藥物名稱，給藥途徑，給藥劑量、未 次給藥時間（峰值取標本），標本名稱，采藥時間，血清治療濃度，血清中毒
濃度，血清血藥濃度。
六、細菌耐藥性擴散及實驗室監測：
耐藥：天藥耐藥，獲得性耐藥（用藥不當造成）適用突變，藥物選擇性壓力
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